HPLC法测定柏艾胶囊中槲皮素的含量.docVIP

HPLC法测定柏艾胶囊中槲皮素的含量 　　【摘要】 建立柏艾胶囊中槲皮素的含量测定的反向高效液相色谱法， 色谱柱Agilent XDB-C18 （4.6 mm×150 mm， 5 μm）， 流动相为甲醇-0.2 mol/L磷酸溶液（50：50）， 流速1.0 ml/min， 柱温30℃， 检测波长256 nm。槲皮素在0.017136～0.25704 μg呈良好的线性关系（r2=0.9996）；平均回收率为99.89%， RSD为0.8%（n=6）。本法重复性好、灵敏度高、定量准确， 可作为柏艾胶囊质量控制方法之一。 　　【关键词】 柏艾胶囊；槲皮素；含量测定；高效液相色谱法 　　柏艾胶囊是一种纯中药制剂， 由侧柏叶、荷叶、艾叶等多味中药组成。能够滋阴凉血、泄火平肝。柏艾胶囊中主药为侧柏叶，其中侧柏叶中含有的槲皮苷， 具有凉血止血， 泄火平肝的作用， 同为侧柏叶中有效成分的槲皮素同样具有此功效。但本公司柏艾胶囊的质量标准中只对槲皮苷的含量进行了测定， 未对槲皮素的含量进行测定， 也未见相关文献报道。为了有效评价药物质量， 本试验采用高效液相色谱法对柏艾胶囊中槲皮素进行含量测定， 方法快速简便， 可以为柏艾胶囊的质量控制提供借鉴。 　　1 仪器与试药 　　Agilent1100高效液相色谱仪；昆山市超声仪器有限公司KQ-500B型超声波清洗器；瑞士梅特勒XS205型电子分析天平。 　　槲皮素对照品（中国食品药品检定研究院， 批号：100081- 200907）， 甲醇为色谱纯， 其他试剂均为分析纯， 水为超纯水。 　　本实验所用柏艾胶囊与柏艾胶囊阴性样品均来自扬子江药业集团有限公司， 柏艾胶囊批号13102341柏艾胶囊阴性对照样品批号：YXDZ 　　2 方法与结果 　　2. 1 色谱条件 色谱柱为Agilent XDB-C18色谱柱（4.6 mm× 250 mm， 5 μm）， 柱温30℃， 流动相为甲醇-0.2 mol/L磷酸溶液（50：50）， 流速1.0 ml/min， 检测波长256 nm。进样量为10 μl， 此条件下， 槲皮素与其他色谱峰能达到基线分离， 阴性对照无干扰， 理论板数按槲皮素计算不低于4000。 　　2. 2 对照品溶液的制备 称取槲皮素对照品适量， 用甲醇溶解并稀释至刻度制成每1 ml中含槲皮素16 μg的对照品溶液。 　　2. 3 供试品溶液的制备 取本品约0.1 g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇20 ml， 密塞， 称定重量， 超声处理30 min， 取出， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 用微孔滤膜（0.45 μm）滤过， 取续滤液， 即得。 　　2. 4 阴性对照样品溶液的制备 精密量取装量差异项下的柏艾胶囊阴性对照样品约0.1 g， 按“2.3”项下的方法制备阴性对照样品溶液。 　　2. 5 干扰试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照样品溶液， 按上述色谱条件测定， 记录色谱图。结果显示， 阴性对照样品对槲皮素的测定无干扰。 　　2. 6 线性关系考察 精密量取2.2项下的对照品溶液（17.136 μg/ml） 1、5、8、1、12、15 μl注入液相色谱仪， 按“2.1”项下条件测定槲皮素峰面积。以对照品进样量（μl）为横坐标（X）， 槲皮素峰面积为纵坐标（Y）， 求得回归方程为Y=4.8354X+5.0914， r2=0.9996。 　　结果表明槲皮素在0.017136～0.25704 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 　　2. 7 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 μl， 按“2.1”项下条件， 连续进样6次， 结果槲峰面积的RSD为0.1%。 　　2. 8 稳定性试验 取供试品溶液， 在配制后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 h分别进样测定。按上述色谱条件测定槲皮素峰面积， 计算相对标准偏差， RSD为0.38%（n=14）， 表明供试品溶液在13 h内稳定性良好。 　　2. 9 重复性试验 取柏艾胶囊（批号6份， 按“2.3”项下方法制备供试品溶液， 分别进样测定， 结果槲皮素的平均含量为0.031 mg/mg， 相对标准偏差RSD为0.8%（n=6）。 　　2. 10 加样回收率试验 精密量取已知槲皮素平均含量为0.0356 mg/mg的样品6份， 分别精密加入0.4284 mg/ml的槲皮素对照品溶液10 ml， 按“2.3”项下方法制备供试品溶液， 再按“2.1”项下方法分别测定， 计算得平均回收率为99.89%， RSD为0.8%。 　　2. 11 样品含量测定 取3