GCMS法测定刺松藻多糖的单糖组成.pdfVIP

福建覆n 第三届诲洋生物育技术论坛 200s．08．19-23 GC．MS法测定刺松藻多糖的单糖组成 张颖+1黄日明1伍秋明2岑颖洲1+ 1．暨南大学化学系 广州510632 2．暨南大学实验技术中心广州510632 GC—MS法测定单糖组成是目前较成熟的方法。分析多糖中的单糖组成及含量，需要先对 多糖进行水解，经衍生化处理后再进行GC--MS分析【11。本文用糖腈乙酸酯衍生化法、糖醇 乙酸酯衍生化法、硅烷化衍生化法等三种不同方法分别对刺松藻多糖的水解产物进行处理 f，1，然后川GC．MS法测定了该海藻多糖的单糖组成及卣分比，并对这三种不同的柱前衍生 化法方法进行了比较。 1．样品制备 多糖水解：准确称取刺松多糖样品1mg，溶丁．1．0mL4mol／L二氟乙酸，充氮气封管，90l 水解60min，冷却后先后加入1．OmL异丙醇和甲醇，川氮气吹干，备用。 衍生物的制备 糖腈乙酸酯衍生化：往蒸干的多糖水解样品中加入10mg盐酸羟胺，O．5mL毗啶，901． 物直接取样品进行GC—MS分析。 糖醇乙酸酯衍生化：往蒸干的多糖水解样中加入30mg硼氢化钠，2ml蒸馏水，充分振 荡屙室温卜放置90rain，单糖还原成相应的糖醇。滴入醋酸分解过量的硼氢化钠，至无气泡 产生为I卜’氮气吹干，加入0．1％(V／V)盐酸甲醇溶液2mL，氮气吹干，重复4次除玄硼酸 酯衍生物，剩余物州…二氯甲烷溶解，离心，取E层清液进行GC．MS分析。 硅烷化衍生：往蒸干的多糖水解样中加入0．5mL八甲基二硅胺烷和O．5mL吡啶，室温卜． 反应30min。反戍物可直接进行气相色谱分析。 2．GC—MS分析色谱条件 m) 色谱柱：DB一5(30m×0．2mrn×0．251．t 进样口温度：280一t：分流进样：柱内流鼙：1．2mL／min。 程序升温：初始温度60．t，保持2rnin，以30／min升温至120i，保持1rain，再以2．5．／min 升温至250保持30min。 ‘通迅联系人：E-mail：olk@,jnu．edu．cn 713 弱建蠢n’ 第三届海洋生物高技术论坛 200s．08．19_23 质谱条件：EI离子源，电子能量70eV3．结果 1)刺松多糖的单糖组成分析结果 刺松多糖的主要单糖组成与其卣分比分别为鼠李糖(1．6％)，阿拉伯糖(22．7％)，木糖(8．2％)， 甘露糖(27。4％)，葡萄糖(3．6％)和iJ皇乳糖(10．6％) 2)三种柱前衍生化法比较 糖腈乙酸酯衍生法的分离效果较好，异构峰少，并且具有制备简单，试剂易得等优点。 714