甘油脱水酶基因gldABC与13丙二醇氧化还原酶基因dhaT的共表达.pdfVIP

科学发展与社会责任 3．讨论 (2002)对野生型拟南芥外施lA能使在体和离体的叶片提早衰老，但同样处玛A敏感的卷须植物突变体 却不能使叶片早熟和衰老。可见内源lA在叶片衰老过程中起着关键作用。本研究发现在停水后第12天， 即极严重干旱胁迫诱导了山杏(耐旱基因型)叶片积累7A(图1，A)，而龙王帽(不耐旱基因型)则不 et et a1．，1997)梨(Gaoa1．，2004) 能积累IA。这同资料报道的大豆(Gree]manMuUet，1995)玉米(Xin 在干旱过程中IA增加的结果相一致。干旱时耐旱的基因型山杏叶片内源IA的增加是否起到促进叶片衰老 的作用?本实验用外源50 et 叶片明显缺少叶绿素的结果相一致(Weidhasea1。，1987)。说明外施IA能加速叶片衰老。而且本试验中 山杏叶片IA含量明显增加，是出现在耐旱的山杏叶片即将衰老之前。并且山杏和龙王帽干旱12天后复水2 个月，山杏又能长出新叶，而龙王帽不能复活。可见干旱产生的lA使山杏叶片提早脱落以此躲过胁迫。 在干旱胁迫下，山杏叶片衰老是否只与IA有关?因为除lA外，ABA和乙烯也毹促进叶片衰老。研究 et 表明，对大麦叶片外施Me—IA不能诱导乙烯的增加，但却使叶绿素降解进而加速叶片衰老(Beltrano a1．，1998)。可见乙烯并不是衰老的必需因子。因为在乙烯不敏感的拟南芥突变株中也能引发衰老。另 (1990)认为，ABA不是衰老的关键因子，可能是一种抵御胁迫和衰老的激素。例如，每天向小麦叶片喷 洒26mg／ll的ABA，则叶片的寿命反而更长。这可能是由于植物在少量ABA的作用下，可提高对其他逆境的 胁迫能力，但如果外界胁迫很大，ABA则变成植物衰老的诱变剂。结合本实验结果，可知ABA和】rA在植 物抵抗胁迫过程中都起积极的作用，只不过作用的方式不同：ABA是通过诱导叶片气孔关闭，进而提高植 物对逆境的胁迫能力；『A则是通过促使叶片衰老而使植物减少水分散失、以此来抵抗逆境的。应该指出， 在本试验中，通过检测干旱过程中杏体内内溺A含量变化以及外施IA对杏树叶片的影响，虽然表现出干旱 胁迫下IA有促进山杏叶片衰老的作用，但与脱落酸相比，在干旱胁迫下JA在促进衰老方面是否起最主要 作用尚待进～步研究。 郑艳1 管艺飞1 刘长江2 (1，沈阳农业大学食品学院食品生物技术实验室邮编1101612辽宁省人民政府邮编110000) I)MDl9Ts5，进而将gldABC与dha．T基因以多顺反子的形式亚克隆至pET一28a(+)表达截体上。终浓度为1mMIPTG诱导重 组大肠杆茵E．coIl／pET一28a(+》／g№Bc—dhaT2h，SDS电泳分析结果表明分别在甘油脱水酶三个亚鲞分子量相 对应的61KDa、2IKDa、16KDa和I，3-丙二醇氧化还原醇亚基分子量相对应的42KD的位置上出现了特异性条带。上 清液中酶活性分别为甘油脱水酶25．7u／札，1，3一丙二醇氧化还原酶50．4u／lTIL。 关键词：甘油脱水酶基因(。gldABC)，l，5一雨二醇氧化还原酶基因(dhaT)；共表逸 1,3一丙二醇是一种重要的化工原料，作为增塑剂、洗涤剂、防腐剂、乳化剂、耐高压润滑剂、染料、 油墨、防冻剂、抗冻剂、融雪剂等被广泛地应用于食品、化妆品、纺织、印染、医药、涂料等行业，并 且显示出优良性能川。目前全球I，3一丙二醇的生产基本上被德国Degussa公司、美国壳牌公司和美国杜邦公 司所垄断[2、”，它们主要采用化学合成法和微生物发酵法。其中化学合成法是工业化生产的主要方法，反 应条件苛刻，生产成本相应较高；而微生物发酵法虽然具有反应条件相对温和、无污染等特点，但是由 368 农业科学与环境保护 于传统发酵只能以附加值较高的甘油为底物，所以生产成本的降低空间也是有限的pJ。 随着生物技术的发展，通过构建基因工程菌使得以廉价碳源为底物一步法