用于腺苷三磷酸ATP检测的酶电极的特性研究.pdfVIP

用于腺苷三磷酸(ATP)检测的酶电极的特性研究· 刘春秀1·2周爱玉1，2王慧1,2罗贤波1·2蔡新霞1 100080 1．中国科学院电子学研究所传感技术国家重点实验室北京2652信箱9室 2．中国科学院研究生院北京 摘要：本研究采用三电极式生物酶传感器检测ATP，采用电镀方法获得纳米铂黑粒子来修饰酶电极， 然后电极表面用表面活性剂争氧化还原聚合物修饰，电极在0。1V的工作电压时具有良好的响应特性， pM范围内(覆盖了人体血液中ATP浓度范围)，线挫相关性良好皿0．99)． 关键词：ATP检测酶电极氧化还原聚合物快速检测 1．引言 一切生命活动都以ATP为壹接能源。体内(骨骼肌和红细胞中)ATP的含量和乳酸的含量变化可直接反 映机体的功能状态和运动能力【l】。因而ATP的测定是对运动员进行机能评定的重要内容。ATP是常用的测定 指标。其测定方法有荧光法[21、生物发光法【3】、电泳法【4】和高效液相色谱法。这些方法有的操作复杂：有的 仪器昂贵、成本高，仅适用于实验室和化验室检测。在快速检测应用中受到一定限制。因此，酶电极方法【5．81 开始受到关注。离子敏感电极具有较低的检测限，但不太稳定【5】；葡萄糖氧化酶／己糖激酶偶联传感器电极检 测范围在0．05～O．5mM【6l，采用25 mM 感器电极的检测限为2 is]。上述传感器尚未达到人体血液的检测范围。本研究采用电流式生物酶传感器 对ATP进行检测。取得了良好的响应特性． 2．实验部分 2．1仪器和试剂 仪器为CHI660电化学工作站，等离子清洗机。 硫酸钠、磷酸盐缓冲液凹Bs)。以上试剂均为分析纯。 2．2生物传感器电极制备(图1) 采用薄膜真空离子溅射工艺在具有电极图案的PC(聚碳酸酯)匕沉积 nm 30rimCr和100Au，去掉电极图形保护膜，获得批量基础金三电极。 然后，在工作电极和对电极上沉积纳米铂黑颗粒：采用计时电流 法，将待镀电极作为工作电极，与CHI电化学工作站的工作电极连 接；铂丝作为对电极，与CHI电化学工作站短接后的参比电极和 对电极连接。电镀工作电压为．2．0V电镀液是24mM的氯铂酸和 2．1mM的醋酸铅，电镀时间为30S。在工作电极和对电极表面形成 高比表面积的铂黑层，不仅可以避免电极表面被钝化，而且有效的增 大传感器电流信号的信噪比。提高电极表面的亲水性，利于酶分子的 ．． 图1酶电极结构示意图 有效固定化。与基础金电极相比，电流信号可增加2个数量级。 创新工程领域前沿项(KGCX2·SW-602-2)资助． 460 V，在0．2M硝酸银、 在参比电极上沉积Ag和AgCl制备参比电极：首先电镀银，电镀工作电压为-o．7 2M碘化钾和O．5m_M硫代硫酸钠的电镀液中电镀1分钟．去离子水冲洗电极表面。去除残留在电极表面的 各种离子。然后，将该电极置于0．1M的盐酸溶液中，在-0．25 V氯化30s，形成AgCl层。 将制备好的电极在烘箱中干燥后，在等离子清洗中采用氧的等离子清洗方法对电极进行处理，活化电极 表面，形成良好的亲水效果。然后，在工作电极上滴加0．5 Ill的电子媒介体MF-2096，室温干燥2h以上。 2．3测试方法 660电化学工作站，CHI的三电极与试条的三个电极相连。采用0．1V的工作电压。 室温条件下，采用CHI 2．4工作原理 7．4的PBS缓冲液进行循环伏安扫描(见 修饰了膜．氧化还原聚合物(Os3+．Os2+)的ATP生物