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石蜡切片步骤及注意事项 时间:2009-08-20 08:22来源:生物吧 作者:刘浩 点击: 394次 ● 取材和固定： 处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。 ●脱水和透明： ８０％酒精（min） ９５％酒精 Ⅰ （min） ９５％酒精 Ⅱ （min） 无水酒精 Ⅰ （min） 无水酒精 Ⅱ 　　 ●取材和固定： 处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。●脱水和透明： ? ８０％酒精（min）? ９５％酒精Ⅰ（min）９５％酒精Ⅱ（min）? 无水酒精Ⅰ（min）无水酒精Ⅱ（min）? 二甲苯Ⅰ、Ⅱ（min）? 2mm? 45-60? 45-60? 45-60? 15-30? 2-4mm? 60-120? 60-120? 60-120? 30? 4-5mm? 120-240? 120-240? 120-240? 60? 注意事项：1.脱水应彻底，否则材料不能透明，影响石蜡的浸入，致使难以切片。2.在低浓度或纯酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。3.在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。4.如需过夜，应停留在70%酒精中。5.使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。●浸蜡和包埋：浸蜡：将透明的组织放入蜡杯（Ⅰ）→蜡杯（Ⅱ）→蜡杯（Ⅲ）。浸蜡时间视材料大小而定，一般总的浸蜡时间为２－４小时左右。包埋：1. 组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。 2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。 3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。 4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。●切片制作：注意事项： 1.室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。在夏季时可用冰块冷却刀和组织块，减少刀与组织块在过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。2.切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放入展片仪水盒内（一般水温为45℃左右）。待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。3. 切片时要及时清洁刀口、除去蜡屑，否则易引起破碎。●贴片：待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中以毛面轻靠切片，并用毛笔将切片一边拨于玻片上，随即将玻片直立提起。快！●烘片与脱蜡：石蜡切片在90度烘箱内烘半小时 经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5-10min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。●染色1.将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中５－１０min，使细胞核着色。2.用自来水洗去切片上残余的染液。3.将切片放入1%盐酸乙醇液（盐酸1份+70%乙醇100份）中褪色，见切片变红，颜色较浅即可，约数秒至数十秒钟。4.入１％氨水或自来水浸洗，使之返蓝。 5.在蒸馏水中浸片刻。 6.０.５％伊红酒精溶液中染色２－５min，使细胞质着色。●脱水和透明：： 　　切片依次入９５％酒精(Ⅰ)→９５％酒精(Ⅱ)→无水酒精(Ⅰ)→无水酒精(Ⅱ)→１：１无水酒精、二甲苯→二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ)，各级中停留１－５min。●封藏：将切片从二甲苯(Ⅱ)中取出，用纸或布擦去材料周围的二甲苯。在材料中央滴一小滴树胶，然后，用镊子加盖盖玻片。切片封好后，放在切片托盘上待干燥，即可用于观察。 (责任编辑：admin)