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石蜡切片步骤及注意事项
石蜡切片步骤及注意事项
时间:2009-08-20 08:22来源:生物吧 作者:刘浩 点击: 394次
● 取材和固定: 处死动物后立即切取组织块,并快速投入固定液中。 ●脱水和透明: 80%酒精(min) 95%酒精 Ⅰ (min) 95%酒精 Ⅱ (min) 无水酒精 Ⅰ (min) 无水酒精 Ⅱ
●取材和固定: 处死动物后立即切取组织块,并快速投入固定液中。●脱水和透明:
? 80%酒精(min)? 95%酒精Ⅰ(min)95%酒精Ⅱ(min)? 无水酒精Ⅰ(min)无水酒精Ⅱ(min)? 二甲苯Ⅰ、Ⅱ(min)? 2mm? 45-60? 45-60? 45-60? 15-30? 2-4mm? 60-120? 60-120? 60-120? 30? 4-5mm? 120-240? 120-240? 120-240? 60? 注意事项:1.脱水应彻底,否则材料不能透明,影响石蜡的浸入,致使难以切片。2.在低浓度或纯酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体。3.在高浓度或纯酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使组织变脆,影响切片。4.如需过夜,应停留在70%酒精中。5.使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入。●浸蜡和包埋:浸蜡:将透明的组织放入蜡杯(Ⅰ)→蜡杯(Ⅱ)→蜡杯(Ⅲ)。浸蜡时间视材料大小而定,一般总的浸蜡时间为2-4小时左右。包埋:1. 组织浸入石蜡后,包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从恒温箱取出置于三角架上,其下点燃酒精灯,以保持石蜡的溶解状态。 2.准备好包埋框,将包埋用的镊子在酒精灯上加温(防止镊子粘蜡)后,左手持蜡杯,右手把加温的镊子放在蜡口(直立状)倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。 3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内,切面朝下放正置入框底并轻轻压平,以保证不再有气泡。 4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上,需注意勿使标签与标本混淆,当蜡块冷至蜡面有透明蜡膜时,浸入冷水中迅速使其冷却,否则蜡内常形成结晶。5.蜡块完全硬固后除去铜框,以保证蜡彻底凝固,立即修切,准备制成切片或储藏备用。●切片制作:注意事项: 1.室温过高时,可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。在夏季时可用冰块冷却刀和组织块,减少刀与组织块在过程中产生的热时,使石蜡保持合适的硬度以利于切片。2.切片经30%的乙醇初展后,再用载玻片捞起蜡带放入展片仪水盒内(一般水温为45℃左右)。待蜡片带中的组织展平后,即可进行分片和捞片。3. 切片时要及时清洁刀口、除去蜡屑,否则易引起破碎。●贴片:待切片在恒温水内充分摊开展平后,将载玻片垂直插入水中以毛面轻靠切片,并用毛笔将切片一边拨于玻片上,随即将玻片直立提起。快!●烘片与脱蜡:石蜡切片在90度烘箱内烘半小时 经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5-10min,然后放入100%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各3-5min,再放入蒸馏水中3min。●染色1.将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中5-10min,使细胞核着色。2.用自来水洗去切片上残余的染液。3.将切片放入1%盐酸乙醇液(盐酸1份+70%乙醇100份)中褪色,见切片变红,颜色较浅即可,约数秒至数十秒钟。4.入1%氨水或自来水浸洗,使之返蓝。 5.在蒸馏水中浸片刻。 6.0.5%伊红酒精溶液中染色2-5min,使细胞质着色。●脱水和透明:: 切片依次入95%酒精(Ⅰ)→95%酒精(Ⅱ)→无水酒精(Ⅰ)→无水酒精(Ⅱ)→1:1无水酒精、二甲苯→二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ),各级中停留1-5min。●封藏:将切片从二甲苯(Ⅱ)中取出,用纸或布擦去材料周围的二甲苯。在材料中央滴一小滴树胶,然后,用镊子加盖盖玻片。切片封好后,放在切片托盘上待干燥,即可用于观察。
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