猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较.pdfVIP

菌 物 系 统 20 t3)：397--402 2001 Mycosystema 猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化 与理化特征的 比较 杨 焱 周 昌艳 白韵琴 张劲松 上海 市农业科学 院食 田菌研 究昕 上海 20]m 摘 要：人工 栽培 的猴头菌子 实体和固体培养的菌丝体分别经热水提取，浓缩 、醇析后得子 实体粗 多糖 (HFP)和菌丝体粗多糖 (HMP)，HFP的得率和 多糖含量均高于 HMP：两者再经 透析 、Sevag法脱蛋 白、乙醇分级沉淀、sephadexG—l00柱层析纯化 ．得子实体纯多糖 hfD—l 和菌丝体纯多糖 hmp一2，经 HPLC检测 hfp一1和 h叩一2为单一均匀多糖。气相色谱分析表明 hfp一1的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖，摩尔比为：0．12：0．04：1．00： 0．71；hmp一2的单糖组成为阿拉伯糖、术糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖，摩尔比为：0．25： 0 41：0 31： ．O0：0．29。紫外光谱 分析表 明组成中不含核酸和蛋 白质，红外光谱分析二 者均有多糖特征吸收峰，hfp一1有 B一型连接的吸收峰 ，hmp～2无 明显的 B一型连接的吸收峰； 经 HPLC进行分子量测定，hfp一1的分子量为 54000，hmp一2的分子量为 68000。猴头菌 子实 体多糖和菌丝体多糖在化学组成上有一定的差异。 关键词 ：猴头菌，子实体多糖，菌丝体多糖．分离纯化 ，比较分析 中周分类号：0939 56 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—3515(2001)03—0397—0402 猴头菌 (Hericium erinaceus Pers．)隶属于担子菌门、猴头菌科，是著名的药食两用菌。 猴头菌具有助消化、利五脏的功能，对慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃溃疡等多种消化道疾病均 有较好疗效，能提高人体免疫能力 (杨焱等，1999，2000)。临床实验已证明，猴头菌是一种治 疗消化道疾病的良药 猴头菌的主要有效成分是猴头多糖，研究表明猴头多糖具有多种生物活 性和药理作用，能增强巨噬细胞的吞噬功能，促进溶血素的形成，抗 白细胞下降，降血糖，抗 凝血，抗血栓、抗突变和抗衰老等 (陈国良等，1996)。 本文对人工栽培的猴头菌子实体和固体培养的菌丝体粗多糖进行了提取分离，比较 了两 者得率和多糖含量的差异；纯化后进行理化分析，比较了二者理化性质和组成的差异。为进一 步地深入研究和产品开发提供了参考。 1材料与方法 I．1原材料 猴头菌子实体和固体培养菌丝体均由上海市农业科学院食用菌研究所提供 1．2药品 与试剂 各种单糖标准品及葡聚糖凝胶为进口生化试剂，其它试剂为国产分析纯试剂 ‘上海市农业科学院青年基金资助项 目 收厦稿 日期；20@l-o】一】5．收修 改稿 日期 ：20o】-03-27 苗 物 系 统 20卷 1．3主要仪器 756分光光度计 (上海物理光学仪器厂)、旋转蒸发仪、LBs一1 00自动部分收集器 (上海 新波无线电厂 )、ZZBS钟控 自动部分收集器 (上海国际微电子公司)、HL．2恒流器 (上海新 波无线电厂)、电热恒温水浴锅 (上海医疗器械厂 )、超高速离一tl,机 (SIGMA公司产品)、冷冻 干燥机 (SIGMA公司产品)、高效液相色谱仪 (Waters公司)、红外光谱仪 (IR-61 1)、气相色 谱仪 (SICO．GC)。 1．4多糖的提取、分离和纯化 1．4．1多糖的提取分离：分别称取风干后的猴头菌固体培养菌丝体和子实体适量，粗粉碎后加 十倍量的水浸泡 1h．加热提取，合并提取液．浓缩 90％乙醇沉淀，取沉淀部分真空干燥．得 子实体和菌丝体的提取分离物 从子实体得到的提取物编号为 HFP，从固体培养菌丝体得到 的提取物编号为 HMP 1．4．2粗多糖的纯化：取 HFP和 HMP适量，加入 100ml蒸馏水，加热搅拌使其溶解，抽滤， 去除杂质。滤液用 3~4倍体积的 10％H2O2进行脱色．需加热。脱色完成后用 Sevage法去蛋 自，加入氯仿和正丁醇 (5：2)0 5倍量 (v／v)，振荡萃取，取上层溶液反复萃取 5-6次至游离 蛋白质完全去除 (用茚三酮检验)。将萃取的上层液置透析袋(2×10 )中．对 自来水淋洗一天r 再对蒸馏水(中间最好换几次蒸馏水)透析一天。用旋转蒸发仪浓缩后，加入三倍体积的 60％ 乙醇沉淀，静置过夜，离心收集沉淀，再用 80％7,醇浸泡沉淀．静置过夜，离一tl,收集沉淀。 用 乙醇 、丙酮相继洗涤沉淀 2-3次，50C～60~C加热溶解沉淀 同时挥 发残 留的 乙醇 、丙酮 ，制 得样 品液 将 HFP和 HMP乙醇分级沉淀获得的粗 多糖进行柱层析分离 ，以 Sephadex G-100作柱填 料．用蒸