铁皮石斛原球茎与原药材免疫调节作用的比较研究.pdfVIP

铁皮石斛原球茎与原药材免疫调节作用的比较研究 上海中医药大学(上海200032) 高建平 金若敏 吴耀平 张海贵 章丹平 常 钰 胡之璧 摘要 目的：比较研究铁皮石斛组织培养原球茎与原药材对免疫功能的作用及急性毒性反应。方法 ：用白细 胞计数法 、免疫器官重鼍法、碳粒廓清法 、淋巴细胞转化试验来研究药物对环磷酰胺造成小 鼠免疫功能低下的对抗 作用；以最大耐受量的方法研究药物的急性毒性。结果：铁皮石斛组织培养原球茎有升高环磷酰胺模型小鼠外周 血白细胞数，增加模型鼠胸腺或脾脏指数，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进模型鼠体内淋巴细胞转化的作用。口服 给予药物量54．56 g生药／kg，小鼠仍能耐受。这些作用与原药材相似。结论：铁皮石斛组织培养原球茎与原药材均 具有提高免疫功能作用，两者作用强度相似，最大耐受量相当于人临床用药量的 227倍。 关键词 铁皮石斛 组织培养 免疫调节 急性毒性 兰科植物铁皮石斛 Dendrobium candidum 以其味 甘、质重、柔韧和粘性大等优良品质被人们视为药材 珍品。质优的铁皮石斛基本组织细胞中的多糖成分 含量高 ，被加工成铁皮枫斗，是一种常用的昂贵补虚 药。已有研究证明石斛多糖具有显著的养阴生津功 效?，能够增强人体免疫功能，是一种有价值的中药 类免疫增强剂L -3J。 然而野生的铁皮石 斛资源有 限，其药理作用又 具有不可替代的功效，为解决药材缺乏，本校中药研 究所进行 了组织培养铁皮石斛原球茎的研究。本文 主要从免疫等方面对铁皮石斛组织培养原球茎和原 药材进行 比较研究。 1 实验材料 1．1 药品与试剂 铁皮石斛 ：由上海 中医药大学 中药研究所提供药材干 品，经鉴定为兰科植物铁皮 石斛的干燥茎。水煎两次 ，浓缩至 0．3 g生药／ml的 水煎液，备用。用时用蒸馏水稀释至所需浓度。铁 皮石斛原球茎 ：由上海中医药大学 中药研究所提供 。 从铁皮石斛植株 上取一 段茎 ，经 消毒 ，剥 取茎 尖组 织 ，置培养基上培养 ，得到铁皮石 斛原球 茎培养物， 并将此培养物冷冻干燥。取上述冷冻干品，煎煮方 法同前，制成水煎液。环磷酰胺：上海华联制药有限 公 司产品 ，批号 991002。临用前用生理盐水配制成 所需浓度。白细胞稀释液：将冰醋酸用蒸馏水配制 成 1％的浓度。植物血球凝集素(P|IA)：上海伊华医 学科技 有 限公 司产 品，批号 010101，临用 前 配成 2 mg／ml的溶液。瑞 氏色素 为上海试 剂三厂产 品 ．批 号 930325。临用前用甲醇配制 。 1．2 动物 昆明种小鼠：清洁级，雌雄皆用，体重 18～22 g，由上海 中医药大学实验动物 中心提供 ，合 格证号为医动字第02—24—3号。 1．3 仪 器 752紫外光栅分光光度计 (上海第三分 析仪器厂)。 2 方法和结果 2．1 对环磷酰胺模型小鼠白细胞数和胸腺、脾脏 指数的影响 取健康小鼠6o只，雌雄各半，随机分 为 6组，见表 1。正常组，模型组小鼠每天分别灌胃 给予生理盐水(0．1ml／lOg)，其余各组按表 1剂量分 别灌胃给予铁皮石斛水煎液或铁皮石斛原球茎水煎 液，每天 1次，连续 9天。除正常组外，其它各组小 鼠于给药的第 3、7天分别腹腔注射环磷酰胺 50 mg／ kg，正常组小鼠同时注射等容量的生理盐水。末次 给药 1．5 h后，小 鼠眼眶取血，测定白细胞数，并用 颈椎脱臼法处死 动物 ，剖取胸腺 、脾脏并称重量 ．按 文献、4J法计算脏器指数，再用 t检验进行统计处理 (下同)。结果显示 ，铁皮石斛原球茎可 升高环磷 酰 胺模型小鼠的白细胞数，作用与原药材相似；可增加 模型小鼠胸腺和脾脏的指数，与原药材相比，作用无 表 1 铁皮石斛原球茎对环磷酰胺模型小鼠白细胞数和胸腺、脾脏指数的影响(X±S，n=10) 注：与模型组比较， PO、05，一PO．Ol；与正常组比较， PO．()5， PO．Ol，下同 中药材第 25卷第 7期 2(}02年 7月 明显差异 ，见表 1。 2．2 对环磷酰胺模型小鼠 巨噬细胞吞噬功能的影 响 小 鼠分组、给药及造模同实验 2．1。末次给药 1．5 h后，各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(用生理盐 水稀释5倍)0．1 nd／10 g，于注射后 2 min、20 min时 分别眼眶取血 2O ，溶于 2 m1 0．1％碳酸钠溶液 中， 摇匀。于波长 660 Ril处 比色，测定 吸收度 值 ，按 文 献、4 J法计算廓清指数 K。结果显示，铁皮石斛原球 茎可明显提高环磷酰胺模型小鼠碳廓清指数，增强 小鼠巨噬细胞的吞噬功能，作用与原药材相似．见表 2。 表 2 铁皮石斛原球茎对环磷酰胺模型小鼠 碳粒廓清速度的影响(x±s，n=10) 2．3 对环磷酰胺模型小鼠淋