体液中生理活性元素存在形态分析方法若干进展.pdfVIP

!!!!!!!! ! ! !!!!!!!! ! ! 评述与进展 体液中生理活性元素存在形态分析方法若干进展 王志华 马会民# 梁树权 （中国科学院化学研究所分子科学中心，北京 100080 ） 摘 要 综述近年生物体液中生理活性元素形态分析方法研究的主要成果及应用，以展望其发展前景。 引用文献 53 篇。 关键词 生理活性元素，形态分析，体液，评述 2000-09-22 收稿； 2001-03-23 接受 本文系国家自然科学基金资助课题 1 引 言 在活的有机体中，维持其正常的生物功能所不可缺少的各种生理活性元素是当今生命科学研究中 的一个重要领域。每一元素呈现不同的生物效应，而效应的强弱依赖于特定器官或体液中该元素的浓 度及其存在的形态。如，人乳中锌多与小分子量配体结合，它有利于锌的吸收，所以婴儿很少表现为锌 的缺乏而患肠病性肢端皮炎。而牛乳中的锌含量虽较人乳高，但大部分锌是与高分子量蛋白质配体结 合而不易吸收，所以只喂养牛乳仍不能满足锌的生理需要及维持代谢平衡〔1〕。因此研究生理活性元素 的存在形态对阐明其生物功能和作用机理甚为重要，并引起国内外学者的高度重视〔2 ~ 5〕。本文简要评 述近年生物体液中生理活性元素形态分析研究的若干进展，以展望其发展前景。 2 研究生理活性元素存在形态采用的分析技术 体液中生理活性元素的形态分析一般是先行分离，然后选择适当的手段加以测定。由于微量元素 在生物样品中的含量很低，且与生物大分子的作用和结合相当复杂，使得定量地分离与分析变得异常困 难。这就对分离及分析技术提出了更高的要求。常用的分离方法有色谱法、化学萃取法、超滤法等。检 测手段常用的有电热原子吸收光谱（ ETAAS ），电感耦合等离子体 - 原子发射光谱（ ICP-AES ），电感耦合等 离子体 - 质谱（ ICP-MS ），中子活化分析（ NAA ）等。元素形态分析方法中发展尤为迅速的是联用技术，一 般是色谱与单元素或多元素检测器联用。联用技术可以集分离手段的高效选择与检测手段的高度灵敏 于一体，因而在形态分析研究中受到了特别关注。 2 .1 色谱法 2 .1 .1 高效液相色谱（ HPLC ） HPLC 能同时分离与检测多种形态，因而广泛用于形态分析。但其在线 检测多为紫外或电化学检测，灵敏度较差，所以常与 AAS 、 AES 及 MS 等联用。 Robards 等〔6〕综述了 1980 ~ 1990 十年间液相色谱在金属测定和金属形态研究中的进展。由于 ICP-MS 的高灵敏度及选择性， LC / ICP-MS 成为一种很好的联用技术。但 LC / ICP-MS 大多数使用传统雾化器，只有 1% ~ 3% 样品进入 等离子体，有很大死体积。 Shum 等〔7〕研制了直接进样雾化器，可以将样品全部送入 ICP ，死体积小于 1 ! L ，并对砷和锡的化学形态进行了研究。 2 .1 .2 快速蛋白质液相色谱（ FPLC ） 缩短色谱过程淋洗时间可降低金属 - 蛋白活性化合物的干扰。 FPLC 的出现满足了这一要求。 Corneiis 等〔8，9〕采用 FPLC 与阴离子交换色谱和阳离子交换色谱联用对血 清中铬的形态进行了分析， Cr 用51 Cr 标记。血清中铬含量约为 0 .16 ! g / L ，由51 Cr 的分布可知约 85%Cr 与转运蛋白（ transferrin ）结合， 8% 与白蛋白结合， 6% 存在于其它组分中。 2 .1 .3 离子交换色谱法（ IEC ） 由于 IEC 所用的流动相为水溶液的缓冲体系，不损伤生物大分子的活 性，分离条件温和，故适合于生物样品的分离，并已广泛用于蛋白质、核酸、糖等生物分子的分离纯化及 生理活性元素的形态分析。 Laborda 等〔10〕采用阴离子交换色谱法对人尿中硒的不同形态（ TMSe + ， SeO 2 - 3 ， SeO 2 - 4 ）进行了研究，选用 0 .01 moI / L 柠檬酸铵（ pH 3 ， pH 7 ）为流动相。但这一浓度的柠檬酸盐 对 ETAAS 测定 Se 有负影响。通过加入基体改进剂镍和镁并应用标准加入法可消除此影响。 2 .1 .4 尺寸排阻色谱（ SEC ） 从生物化学和分子生物学的角度看， SEC 的突出优点是样品物质分离之 后，不改变其生物学性质。这一点对于生物活性物质来说特别重要，因而成为形态分析中常用的分离方 法。 Barth 等〔11〕曾综述 SEC 及其相关的分离技术和部分应用。从理论上讲，无论采用什么类型的缓冲 溶液，都不影响 SEC 的分离效果。然而，凝胶表面存有残留羟基，可对试样造成吸附或其它非尺寸排阻 效应，例如引起离子交换，从而影响分离效果。柱容量较小则为其另一缺点。 2 .1 .5 气相色谱法（ GC ） GC