第三章培养基预案.pptVIP

一、灭菌原理 所谓灭菌就是杀死一切微生物，包括微生物的营养体和芽孢，这一概念不同于消毒。 在工业生产中，对于培养基、管道、设备的灭菌，通常采用蒸汽加热到一定的温度，并保温一段时间的灭菌方法，称之为湿热灭菌 ？ 湿热灭菌的显著优点是： 使用方便，无污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培养基中，也可以通过管道排出。 §2-4 培养基的灭菌 关于灭菌的几个基本概念： 1.微生物的热阻 2.理论灭菌时间 3.灭菌温度的选择 1.微生物的热阻 定义：微生物的热阻就是指微生物对热的抵抗能力。其对热的抵抗能力越大，可以理解为热阻越大，衡量不同的微生物对热的抵抗能力的大小，可以使用相对热阻的概念。 相对热阻：两种微生物的热阻之比。 例如：芽孢/大肠杆菌=3000000/1；病毒/大肠杆菌=1—5/1等 2.理论灭菌时间 灭菌过程应遵循单分子反应的速度理论： -dN/dt = k * N 式中 -dN/dt：表示灭菌过程中某瞬间活菌的减少速率 N：表示灭菌过程中某瞬间的活菌数 K：表示灭菌过程中菌体死亡的速度常数， K=f(灭菌温度、菌种、培养基等) 上式的积分形式为： t = 2.303/k * lnN0/NS 式中 N0，NS： 分别表示灭菌前、灭菌后培养基中菌体的浓度（个/ml） k：意义同上 t ：表示理论灭菌时间（秒） 理论灭菌时间的计算需要注意以下几个问题： （1）K值因不同的微生物种类不同、不同的生理状态、不同的外界环境，差别很大，实质上，它是微生物热阻的一种表示形式，微生物的热阻越大，K值也越小。 例如：芽孢，在121℃时，K=60/s 营养体，在121℃，k=60—6*1010/s （2） 在计算过程中，N0，NS如何取值？ （3）上述灭菌时间，通常称之为理论灭菌时间，只可以用于工程计算中，在实践过程中，因蒸汽的压力问题（不稳定）、蒸汽的流量问题有很大差别，甚至培养基中的固体颗粒的大小、培养基的粘度等因素，都会影响灭菌效果，因此在实际生产中，通常采用经验数值： 间歇灭菌，121℃，20—30分钟 连续灭菌，137℃，15—30s，在维持罐中保温8—20分钟。 3.灭菌温度的选择 灭菌温度的选择应考虑的因素主要有： a.微生物的热致死温度，应高于该温度。通常以芽孢为准。何为热致死温度？（10分钟，全部死亡的温度） b.营养成分的破坏，灭菌的过程实质上也是营养成分破环的过程 因此，灭菌温度的选择，应是在保证灭菌效果的前提下，尽可能减少培养基中营养成分的破坏。 第三章 微生物用培养基及灭菌 本章的主要内容： 1、培养基的制备 2、starch 的水解 3、培养基的灭菌 §3-1 培养基的制备及要求 一、培养基用原材料及要求 1、培养基原材料的要求 （1）价格低廉，易得到（价格低，但不一定易得到，例如：地瓜干） （2）对微生物的生长繁殖和代谢无抑制作用的物质 （3）微生物的代谢产物无有害物质。 2、培养基用原材料的种类 碳源： starch 及其水解糖液 含有starch 及其水解产物的废弃物： 味精废水、粉丝生产废水等 化工石油产品：醋酸、甲醇、乙醇、甲烷等 氮源： 无机氮源： 氨水、尿素(有脲酶的微生物) 、 (NH4)2SO4、 NH4NO3、NH4Cl等，使用方式： 有机氮源： 豆粕、玉米浆、酵母粉、酵母浸出物、鱼粉、 菌体蛋白粉、 玉米蛋白粉、牛肉膏等 二、培养基的种类 按用途可分为： 生产培养基：厌氧发酵、 需氧发酵、固体发酵 种子培养基： 摇瓶培养基（优化工艺……） 检查培养基： 如：HASS发酵用的检查培养基： 营养琼脂 0.5%—0.55%、Sarch 2%、Glucose 0.5% 平板培养后，根据透明圈的大小…… 本章涉及到的培养基为：生产使用的培养基 二、培养基的制备 1.培养基配制的原则 （1）合适的C/N （2）在确定了C/N的前提下，需要研究的是不同的氮源对发酵的影响。 （3）大多数的工业培养基都使用玉米浆。 菌体的增殖速度有关 与菌体细胞膜的合成有关，从而影响到细胞膜的通透性 对于某些菌体，与代谢途径和代谢机制有关。 （4）生长因子 大多数菌体的生长因子如下： 维生素：大多数维生素是微生物生长的辅酶，需要量很少，1—50μg/L。 AA：凡是微生物自身不能合成的AA则必须以游离的AA或