重组金针菇免疫调节蛋白的纯化及生物活性研究.pdfVIP

第 16卷 第 2期 2015年4月 北华大学学报(自然科学版) JOURNAL OF BEIHUA UNIVERSITY(Natural Science) VoI．16 No．2 Apr．2015 文章编号：1009—4822(2015)02—0178 04 DOI：10．1 1713／j．issn．1009-4822．2015．02．009 重组金针菇免疫调节蛋白的纯化 及生物活性研究 赵 雪，宋文刚 (北华大学药学院，吉林 吉林 132013) 摘要：目的 研究重组的金针菇免疫调节蛋白(reFIP—fve)对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用、诱导小鼠脾淋巴细胞 对白细胞介素一2(IL一2)的促分泌作用及对血细胞的凝集作用．方法 采用离子交换色谱法，利用 sP Sepharose XL色谱柱纯化重组的免疫调节蛋白；将纯化后的蛋白作用于小 鼠脾淋 巴细胞和血细胞，用 MTr法检测蛋 白对 脾细胞增殖和血细胞凝集的影 响；用 ELISA法检测蛋白对淋 巴细胞 分泌细胞 因子 的作用．结果 经过 sP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度为 86％的重组蛋白；纯化蛋白浓度在 80 mL时最大限度促进细胞增 殖；蛋白浓度在 2 tLg／mL时开始出现凝血；ELISA检测结果显示 ：重组的金针菇免疫调节蛋白能明显增强小鼠脾 淋巴细胞分泌白细胞介素 2(IL一2)的水平．结论 经过 SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度较高的蛋白； 纯化后的蛋白与小鼠脾淋巴细胞共同培养，不仅可以促进脾细胞的增殖，而且能增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细 胞介素 2的水平；蛋白与血细胞共同培养能够促进血细胞的凝集． 关键词：金针菇免疫调节蛋白；纯化；生物活性 ；增殖；凝集 中图分类号：Q786；R965 文献标志码 ：A 【引用格式】赵雪，宋文刚．重组金针菇免疫调节蛋白的纯化及生物活性研究 [J]．北华大学学报：自然科学版，2015，16(2)： 】78一】8】． On Purification and Biological Activity of Recombinant Flammulina Velutipes Immunomodulatory Protein Zhao Xue，Song Wengang (School ofPharmacy，Beihua University，Jilin 132013，China) Abstract：Objective To study the efects of reFIP—fve on spleen lymphocytes proliferation，interleukin一2(IL一2) secretion from spleen lymphocytes．and on the blood cells agglutination in mice．M ethod The reFIP—fve was purified through ion exchange chromatography．by using SP Sepharose XL eolumn．MTT method was used to detect the effects of the purified protein on spleen cels proliferation and blood cells agglutination．And the runetion of reFIP．fve in cvtokine secretion from lymphocytes was tested by ELISA method．Results A purity of 86％ recombinant protein could be obtained by using SP Sepharose XL column．The purified protein could enhance maximum cel prolif~ ration in the concentration of 80 g／mL，and cloting appeared in the concentration of 2 g／mL．ELISA showed that the protein significantly enhanced the secretion level of IL一2 from spleen lymphocytes in mice．Conclusion A high purity protein could be obtained through SP Sepharose XL column． When CO．cultured with splee