污染土壤中主要石油降解基因AlkB和Nah定量检测方法的建立和应用.pdfVIP

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2017-04-25 发布于北京
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污染土壤中主要石油降解基因AlkB和Nah定量检测方法的建立和应用.pdf

第 42 卷分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告第 9 期　 2014 年 9 月　　　　　　　　　　　 Chinese Journal of Analytical Chemistry 　　　　　　　　　　　 1348 1353 ~ DOI 10. 11895 / j. issn. 0253-3820. 140103 : 污染土壤中主要石油降解基因 AlkB 和 Nah 定量检测方法的建立和应用刘庆龙唐景春? 万晓彤南开大学环境科学与工程　学院环境污染过　程与基准教育部重点实验室 ( , , 天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室天津 , 300071) 摘要建立了实时荧光定量聚合酶链式反应检测油田污染土壤中烷烃降　　 SYBR Green I (Real Time-qPCR) 解基因和萘降解基因的方法比对相关降解石油菌株的序列设计合成针对烷烃和萘降 AlkB Nah 。 GenBank , 解基因扩增引物和将纯化的常规胶回收产物与载体连接转化到感 AlkBf / AlkBr Nahf / Nahr。 PCR pEASY-T1 , 受态细胞培养提取并梯度稀释阳性克隆质粒构建标准测定曲线扩增体系最佳反。 , Real Time-qPCR 。 25 μL 应条件前后引物终浓度为和基因最 : 0. 2 μmol / L,12. 5 μL 2×TransStart Top Green qPCR SuperMix,AlkB Nah 适退火温度分别为和技术显示出很高的灵敏性和重复性比传统技术灵 50 ℃ 57 ℃ 。 Real Time-qPCR , PCR 敏度高倍对采集于某油田个功能区的土壤样品中定量检测显示石油污染严重的采油区含 100 。 3 14 AlkB , 有最高的拷贝数污染较轻的生活区