RPHPLC法测定舒肝保健茶中齐墩果酸的含量.docVIP

　　RPHPLC法测定舒肝保健茶中齐墩果酸的含量 作者：王强，王跃飞，潘桂湘，张恒昆，戚爱棣 【摘要】 目的 建立舒肝保健茶中齐墩果酸的含量测定 方法 。方法 采用RPHPLC法，以metry shield C18柱（3.9 mm×150 mm，5 μm）为色谱柱，乙腈水（体积比71∶29）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm，柱温25 ℃。结果 在0.0790～1.264 μg范围内，齐墩果酸的进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为96.5%，RSD为1.0%（n=6）。结论 本法灵敏、简便、重现性好,结果准确、可靠，可用于舒肝保健茶的质量控制。 【关键词】 反相高效液相色谱法；舒肝保健茶；齐墩果酸 　　舒肝保健茶是由天津中医药大学中医药 研究 院制剂中心新研发的一种复方保健品，主要由藏茵陈、栀子、淡竹叶、甘草等成分组成，具有清热解毒、舒肝利胆的作用，可用于预防肝炎，主要用于病毒性肝炎、脂肪肝、消化不良的防御和 治疗 。藏茵陈是此方中的君药，其主要有效成分是齐墩果酸。 　　2.6 线性关系考察 　　精密称取50 ℃减压干燥至恒重的齐墩果酸对照品6.32 mg，置50 mL容量瓶中，加80%（质量分数）乙腈溶解并定容至刻度，摇匀（质量浓度为126.4 μg/mL），分别用80%（质量分数）乙腈配成浓度为126.4、63.2、31.6、15.8、7.90 μg/mL的对照品溶液，各取10 μL进样，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=1754.3(ρ)+1355；r=0.9999，齐墩果酸在0.0790～1.264 μg/mL范围内呈良好的线性关系。 　　2.7 精密度试验 　　精密吸取同一份供试品溶液，连续进样6次，测定齐墩果酸峰面积值，RSD为1.7%（n=6），表明精密度良好。 　　图1 HPLC色谱图（略） 　　A.对照品; B.样品; C.阴性对照（缺藏茵陈） 　　Fig.1 HPLC Chromatograms（A control standard; B Sample; C Negative sample） 　　2.8 稳定性试验 　　按“2.3”项下操作制备一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h测定齐墩果酸峰面积，RSD为0.35%，结果显示供试品溶液在12 h内稳定。 　　2.9 重复性试验 　　取同一批号供试品（批号：061211）6份，各约2 g，精密称定，分别按“2.3”项下操作制备供试品溶液，测定，得平均质量分数为147.9 μg/g，RSD为1.4%（n=6），表明该 方法 的重复性较好。 　　2.10 加样回收率试验 　　取本品（批号：061211，质量分数：147.9 μg/mL）9份，各约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加质量浓度为126.4 μg/mL的齐墩果酸对照品溶液适量，挥干，加入水20 mL溶解，再用乙醚萃取3次，每次20 mL，分取乙醚层，合并，蒸干，用80%(质量分数）乙腈溶解，转移至5 mL容量瓶中定容至刻度，滤过，测定每份的含量， 计算 回收率，平均回收率为96.5%，RSD为1.0%（n=9），结果见表1。 　　表1 加样回收率试验结果（略） 　　Tab.1 Results of recovery test 　　2.11 样品含量测定 　　分别按“2.3”项下操作，制备不同批号（061211，061212，061213）的供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进行测定。测定结果见表2。 　　表2 样品含量测定结果（略） 　　Tab.2 Analytical results of sample 　　3 讨论 　　3.1 供试品处理方法的选择 　　在供试品的处理过程中，首先采取的是用甲醇直接超声提取的方法，但在用80%(质量分数）乙腈复溶时，溶液出现了分层现象，原因可能是提取物中含有的蔗糖溶于水相而形成分层；于是再采取水溶解-有机溶剂萃取的方法处理，选择了乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷3种溶剂进行考察，结果发现乙醚的效果最好，且乙醚的沸点低，回收简便，故选用乙醚处理［2］。处理过程中对于乙醚的萃取次数也做了考察，结果显示乙醚萃取3次，每次20 mL效果最好。最终确定了水溶解乙醚萃取的处理方法。 　　3.2 流动相的选择 　　由于齐墩果酸极性较小，曾以甲醇水（体积比90∶10）为流动相进行考察［3］，结果样品中齐墩果酸分离效果不理想，于是改为以乙腈水为流动相［4］，分离效果要好于甲醇水，并最终确定在乙腈水（体积比71∶29）的条件下，齐墩果酸峰形较好，在样品中能达到完全分