两种细胞系用于建立体外脂肪肝模型的比较.docVIP

　　两种细胞系用于建立体外脂肪肝模型的比较 作者：潘雪丰，温彩霞，许建华 【摘要】 目的 对比油酸诱导肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L02建立的肝细胞脂肪变性模型,通过检验复方蛋氨酸胆碱的防治作用，寻找简便、稳定的体外药物筛选模型。方法 设正常组、HepG2模型组、HepG2不同浓度给药组、L02模型组、L02不同浓度给药组、用油酸诱导肝细胞脂肪变,复方蛋氨酸胆碱干预，以油红O染色镜下观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞上清中的ALT、AST、γGT水平。结果 油酸刺激HepG2、L02 肝细胞24 h,细胞内典型脂肪滴形成。复方蛋氨酸胆碱2次给药，药物难以使HepG2细胞内脂滴减少，L02细胞在加油酸48 h后油红O 染色证明细胞内脂滴可减少，脂滴表达的红色IOD值，各给药组与模型组比较，差异有极显著性(Plt;0.01)。细胞上清液中ALT、AST、γGT，复方蛋氨酸胆碱各组与模型组比较差异有显著性，证实其对肝细胞损伤较小。结论 L02比HepG2更适合作为体外的筛药细胞模型，油酸刺激L02细胞形成脂肪变，药物提前24 h干预，24 h后再给药1次，这种造模和给药方案可作为一种可行的脂肪肝细胞筛药模型使用。 【关键词】 肝癌细胞株HepG2;L02肝细胞株;油酸;脂肪肝;模型;体外;复方蛋氨酸胆碱 Abstract:Objective To pare todels of hepatocytic steatosis in vitro，a cell HepG2 and human liver cell L02 ination the role of pound methionine and choline bitartrate,to find a convenient and stable model in vitro for drug screening.Methods Normal group,HepG2 model group,groups of HepG2 cells treated ethionine and choline bitartrate at different concentrations,L02 model group,and model groups of L02 cells treated odels icroscope. ALT,AST,and γGT in cell supernatant icroscope. I1640培养基，美国GIBCO公司;胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司;小牛血清，美国GIBCO公司;胰蛋白酶，美国 Hyclone 公司;四甲基偶氮唑盐(MTT),上海华舜生物工程公司;油红O，国药集团化学试剂有限公司;丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、γ谷氨酰转肽酶(γGT)试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司。 　　A/B3 1285型超净工作台，美国Forma公司;371型直热式二氧化碳培养箱，美国Forma公司;550 型酶标仪，美国BioRad公司;SD811L半自动生化仪，上海迅达医疗仪器厂。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养方法 用6孔板将人肝癌细胞株HepG2、人正常肝细胞株 L02 接种于含 5%胎牛血清(FBS)、5%小牛血清的 RPMI 1640 培养液中，细胞培养同时放入盖玻片，使细胞贴壁于玻片上生长。置 37 ℃、5%CO2饱和湿度孵育箱内培养。根据细胞生长情况，每2～3天用0.25%的胰蛋白酶消化，进行传代培养。 　　1.2.2 MTT实验筛选DMSO、复方蛋氨酸胆碱作用浓度 将HepG2、L02细胞培养于96 孔板中,实验分别设空白对照组、复方蛋氨酸胆碱(DMSO溶解)、DMSO各3个实验组，每组均设3个平行孔。分别加入含不同浓度的DMSO(表1)、复方蛋氨酸胆碱(表2),用MTT比色法测定细胞增殖情况(以吸光度A值表示),了解药物对细胞增殖的影响情况，实验重复3次。 　　抑制率IR(%)=(1-实验组平均A值/空白对照组平均A值)×100% 　　1.2.3 脂肪肝细胞模型的建立 接种HepG2、L02细胞24 h，待细胞贴壁生长后，设对照组、模型组。对照组：用RPMI 1640(含 5% 胎牛血清，5% 小牛血清)培养液培养;模型组：分别用含20、40、60、80、100、120 μg·mL-1的油酸及培养液培养;每组均设3个平行孔。培养 3 d，用油红O染色镜下观察细胞浆内变化。选择油酸作用最佳浓度，实验重复3次。 　　1.2.4 分组给药 将HepG2、L02细胞各分5组,对照组(用正常培养基)、模型组(油酸以DMSO溶解，浓度由预实验确定)、给药组(复方蛋氨