乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A549细胞侵袭力的抑制作用.docVIP

　　乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A549细胞侵袭力的抑制作用 作者：陈志涛 田辉 岳韦名 李林 亓磊 朱应超 【摘要】 目的 探讨乙酰肝素酶(heparanase，HPSE )反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide，ASODN)对人肺癌A549细胞侵袭力的抑制作用。方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN，以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染人肺癌A549细胞进行培养，采用流式细胞分析技术和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测肺癌A549细胞HPSE蛋白及其mRNA表达的变化;以Matrigel细胞侵袭试验对HPSE ASODN对肺癌A549细胞侵袭的抑制进行检测。结果 ASODN各组与正常对照组和脂质体组比较及ASODN各组间比较HPSE mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均受到明显抑制 (Plt;0.01);ASODN在终浓度为100、200、400 nmol/L时对肺癌A549细胞侵袭力的抑制率分别为55.6%、82.3%和91.2%。结论 HPSE ASODN通过下调HPSE mRNA和蛋白的表达可显著抑制肺癌A549细胞的侵袭力，并呈剂量依赖性。 【关键词】 肺肿瘤;乙酰肝素酶; 反义寡核苷酸 　　【Abstract】 Objective To evaluate the inhibitory effect of HPSE antisense oligodeoxynucleotide (ASODN) on the invasiveness of human lung cancer A549 cell lines.Methods HPSE ASODN entary RNA bedded by cation lipofectin，it an lung cancer.The expression of HPSE protEin and HPSE mRNA in A549 cell lines etry and RT PCR.Meaneasure the inhibitory effect of HPSE ASODN on the invasiveness of human A549 cell lines.Results The HPSE protEIn and HPSE mRNA expression and invasiveness of human A549 cells treated ong the groups of ASODN (Plt;0.01).Besides，the difference of inhibitory effect ong the cells treated ol/L respectively.Conclusions By doRNA and HPSE protein，HPSE ASODN has significant inhibitory effect on the invasiveness of human A549 cell line in a dosedependent manner. 　　【Key ;Heparanase;Antisense oligodeoxynucleotide 　 侵袭和转移是肺癌的重要特征，是导致肺癌病人死亡的主要因素。乙酰肝素酶(heparanase，HPSE)是迄今为止发现的唯一能够降解细胞外基质和基底膜中的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate，HS)的酶，对于肿瘤细胞的侵袭和转移具有重要作用〔1〕。本研究采用反义寡核苷酸(ASODN)技术转染人肺癌A549细胞，用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和流式细胞学方法检测A549细胞HPSE mRNA和蛋白表达，同时采用基质凝胶侵袭实验对转染细胞的侵袭力进行检测，以初步探讨HPSE ASODN对A549细胞的影响。 　 　1 材料与方法 　　1.1 细胞培养 人肺癌细胞株A549购自中科院上海细胞所，所有培养工作均在无菌环境下进行，培养于含有10%小牛血清的RPMI1640中，实验所用细胞均处于对数增长期。 　　1.2 反义寡脱氧核苷酸的设计、合成 根据HPSE基因序列(GenBank accession number：AF155510)。设计互补于HPSE mRNA起始密码区(AUG及其下游17个核苷酸序列)ASODN序列：ASODN 5′GGCTTCGAGCGCAGCAGCA13′，在GenBank中行Blastn证实ASODN仅与HPSE基因相应位点匹配。以上寡核苷酸序列由上海生工生物工程公司合成、纯化，并行硫代磷酸化修饰，同时以荧光素FITC标记末端碱基