急性髓系白血病细胞Flt.docVIP

　　急性髓系白血病细胞Flt 作者：汪亚伦，王彤，许凤，冮岩，王杰 【摘要】 本 研究 探讨急性白血病（acute leukemia，AL）细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)发病的关系。采用RT-PCR 分析 联合测序的 方法 检测82例白血病细胞株，其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株（ALL），5株CML细胞株的Flt-3表达和Flt-3/ITD突变。结果表明： 77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性，阳性表达率为62%，其中20例AML细胞株中有12例阳性，阳性表达率为60%；57例ALL细胞株中有33例阳性，阳性表达率为58%。5例CML细胞株中有3例阳性，阳性表达率为60%。12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达（阳性率为8.3%），测序显示存在有29 bp的两个编码重复序列，其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列。未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL (Plt;0.05)。结论: Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达，在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列。Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助于ALL特别是AML的诊断。 【关键词】 Flt-3 基因 　　Analysis of Flt-3 Expression and Flt-3/ITD Mutation in Acute Myeloid Leukemia Cells 　　Abstract This study ed to explore the relationship betutation in acute leukemia (AL) cell line and pathogenesis of AL，especially AML. The Flt-3 expression and Flt-3/ITD mutation ethod in 82 leukemia cell lines including 20 AML，57 ALL and 5 CML cell lines. The results indicated that positive results of Flt-3 expression al gene product in 1 AMOL cell line out of 12 AML cell lines al gene product shoinently higher than that in mature B cell ALL (Plt;0.05). It is concluded that the Flt-3 expression is different in various leukemia cells. Flt-3/ITD duplication utation may contribute to the diagnosis of ALL，especially to AML. 　　Key utation 近年来的研究表明，Fms样酪氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase 3，Flt-3)在正常的造血分化过程中具有重要的作用［1］。人Flt-3基因定位于染色体13q12，具有RTKm成员共同的结构，由胞外5个免疫球蛋白样结构区、近膜区(JM)、穿膜的2个激酶区(TK1和TK2)［由1个激酶插入区(KI)分隔］、C-端胞内区等几部分构成［2］。Flt-3除了在胸腺、肝、脾和淋巴结等组织中表达之外，而且也存在于人骨髓等造血系统，具有诱导造血干细胞分化和增殖的作用。Flt-3跨膜区内部串联重复(internal tandem duplication，ITD)突变是近年来发现的Flt-3 基因最常见的一种突变类型，与AML的发生有关，是AML中发生率最高且与预后相关的突变［3］。为探讨Flt-3特别是Flt-3/ITD突变在恶性血液病不同类型、亚型的突变及分布情况，我们运用聚合酶链反应结合测序的方法对不同种类的AL细胞株的Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变进行了研究，探讨Flt-3与AML发生的关系。 　　材料和方法 　　白血病细胞株 　　82个白血病细胞株包括AML细胞株20个(AML M1/M2 11个，AMMOL M4 1个，AMOL M5 8个)，ALL细胞株57个(c-ALL 21个，pre-B ALL 9个，B-ALL 11个，T-ALL 16个) 和CML细胞株5个。 　　细胞的采集 　　取用ACD-A抗凝骨髓5 ml，常规分离骨髓单个核细胞(BMMNC)