血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡与乙酰胆碱含量变化.docVIP

　　血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡与乙酰胆碱含量变化 作者：张丽香 蔺心敬 李吕力 肖继东 王铁建 罗永坚 【摘要】 目的 探讨血管性痴呆（VD）大鼠海马神经元凋亡和乙酰胆碱(ACh)含量变化在VD发病过程中的作用。方法 将90只大鼠随机分为模型组、假手术组和正常组,每组30只。再将各组的30只大鼠根据造模后断头取脑时间随机分为3小组，即7、14、21 d组,每组10只大鼠。采用反复大鼠双侧颈动脉缺血再灌注,加剪尾放血法制备VD大鼠模型;用TUNEL法检测海马组织的凋亡细胞，用生化法检测ACh含量。结果 模型组大鼠海马组织在第7、14、21天均有大量凋亡神经元，且ACh含量持续降低，与假手术组及正常组相比差异显著（P＜0.01）。结论 脑海马组织神经元的大量凋亡和ACh含量持续降低可能在VD发病过程中起重要作用。 【关键词】 血管性痴呆；海马；神经元凋亡；乙酰胆碱 【Abstract】Objective To investigate the change of neuron apoptosis and acetylcholine in hippocampus of rat entia (VD）. Methods 90 adult odel, shamoperation, control groups. Each group ly divided into three subgroups according to different time after bEing killed, including 7, 14 and 21 d after VD model. The imitative VD model on carotid artery and bloodletting from rat′s tail. The cell apoptosis munohistochemistry in hippocampal. Results The apoptotic neuron of the hippocampal in the model group markedly increased and the acetylcholine decreased than those of the shamoperation and the control group at 7, 14, 21 days (P＜0.01). Conclusions The increase of the neuron apoptosis and the decrease of the acetylcholine in hippocampal tissues may be the pathological reason of the VD. 【Key entia；Hippocampus；Apoptosis；Acetylcholine 　　近年研究表明〔1〕，在大于65岁的脑卒中患者中，约25%～41％的患者在三个月内 发展 为血管性痴呆（VD）。防治VD已成为目前急需解决的医疗和社会问题，但是目前对VD的发病机制尚不清楚。脑海马组织是与人类学习、记忆关系最为密切的功能区,具有对缺血的选择易损伤性〔2〕，其神经元凋亡可能在VD的发病过程中具有重要作用〔3〕。脑内乙酰胆碱（ACh）则是迄今发现的与人类学习、记忆关系最为密切的神经递质。有关神经元凋亡和ACh在VD大鼠脑组织中的动态变化及作用尚未见报道。本实验旨在通过对VD大鼠海马组织神经元凋亡和ACh含量的动态观察，探讨其在VD发病过程中的作用，以期为临床更好地预防VD的发生、发展提供理论基础。 　 　1 材料与方法 　　1.1 试剂和仪器 　　凋亡TUNEL试剂盒购自美国ROSS公司，SABC、DAB 染色试剂盒、苏木素均购自武汉博士德生物工程有限公司。ACh由石家庄药业集团股份有限公司生产，UV3000紫外分光光度计由日本岛津公司生产，TD2000 计算 机图像分析系统由北京天地公司生产。 　　1.2 动物来源和分组 　　in后松开丝扣使血液灌注10 min，共重复3次，同时在距尾尖1 cm处剪断放血约1 ml后热凝止血。第3次再灌注后观察30 min后缝合皮肤，切口局部注射庆大霉素0.2万U,术后肌注青霉素0.2万U/d，连续3 d。假手术组大鼠仅分离双侧颈总动脉，对照组大鼠不做任何处理。 　　1.4 海马组织神经元凋亡检测 　　1.4.1 组织标本处理 　　实验终点将大鼠给予4%多聚甲醛灌注30 min。断头取脑放入4% 多聚甲醛固定后，依次酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋。连续冠状切片，片厚5 μm。 　　1.4.2 TUNEL法检测细胞凋亡 按试剂盒说明进行。 　　1.4.3 结果