第四章酶恢复.ppt

二、同工酶 概念 ： 同工酶是指能催化相同的化学反应，但酶蛋白的分子结构、理化性质和免疫性能等方面都存在明显差异的一组酶。一般为寡聚蛋白。 原级同工酶---指不同基因编码产生的同工酶. 次级同工酶---指酶蛋白合成后由于修饰加工而产生的不同分子形式。 同工酶举例： 1959年，用电泳分离法发现动物的乳酸脱氢酶具有多种分子形式。 H H H H H H H M H H M M H M M M M M M M LDH1 (H4) LDH2 (H3M) LDH3 (H2M2) LDH4 (HM3) LDH5 (M4) 乳酸脱氢酶的同工酶 LDH1(H4) LDH2(H3M) LDH3(H2M2) LDH4(HM3) LDH5(M4) 心肌 肾 肝 骨骼肌 血清 - + 不同组织中LDH同工酶的电泳图谱 二、酶浓度对酶反应速度的影响 在一定条件下酶促反应的速度与酶的浓度成正比。 当底物浓度大大超过酶浓度时，反应达到最大速度。如果此时增加酶的浓度可增加反应速度，酶促反应的速度与酶的浓度成正比关系。 三、pH对酶促反应速度的影响 pH值影响酶活力的原因: 影响酶分子构象的稳定性。 影响酶分子（包括辅因子）极性基团的解离状态，使其荷电性发生变化 c. 影响底物分子的解离状态 酶反应速度最大时的溶液pH，称为酶的最适pH 四、温度的影响 温度对酶促反应速度的影响： a.一方面是温度升高,酶促反应速度加快(温度系数Q10：温度提高10? C，反应速度提高2倍。 Q10多为1-2 ) 。 b.另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失，反应速度很快下降。 使酶促反应速度达最大时的温度称为酶的最适温度。 五、激活剂对酶反应速度的影响 凡能提高酶活性的物质，都称为激活剂 （1）无机离子：金属离子(K+ Na+ Mg2+ Zn2+ Fe2+ Ca2+)、阴离子(Cl- Br-)、氢离子 （2）简单有机分子：某些还原剂、乙二胺四乙酸（EDTA） (3)具有蛋白质性质的大分子物质:将酶原激活 六、抑制剂对酶反应速度的影响 凡使酶的活性降低或丧失，但并不引起酶蛋白变性的作用称为抑制作用。 主要是由于酶的必需基团化学性质的改变而引起的。抑制作用不同于失活作用。 能够引起抑制作用的化合物则称为抑制剂。 （抑制剂不同于变性剂） 抑制作用的类型 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 非专一性不可逆抑制作用 专一性不可逆抑制作用 a.不可逆抑制作用 b.可逆抑制作用 不可逆抑制作用（修饰抑制） 定义：抑制剂与酶的活性中心的功能基团共价结合而抑制酶的活性,不能用透析或超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶活性。 非专一性不可逆抑制作用： 这类抑制剂作用于酶分子上一类或几类不同的基团或作用于具有相同基团的几类不同酶。 一些重要的抑制剂： 1.有机磷化合物—与酶活性直接有关的丝氨酸上的-OH牢固地结合，从而抑制某些蛋白酶或酯酶。 （敌百虫、敌敌畏、农药1605等） 2.有机汞、有机砷化合物—与酶蛋白上的-SH作用，从而抑制含-SH酶的活性。 （对氯汞苯甲酸） 3.氰化物、硫化物和CO—这类物质能与酶中的金属离子形成较为稳定的络合物，使酶的活性受到抑制。 4.重金属—Ag、Cu、Hg等盐能使大多数酶失活，加入EDTA可以除去。 5.烷化剂—这一类试剂中往往含一个活泼的卤素原子，如碘乙酸、碘乙酰胺和2，4-二硝基氟苯等，使酶蛋白中的 –SH、-NH2、-OH等发生烷基化， 失活。 专一性不可逆抑制作用： 这类抑制剂常常是底物类似物，与酶活性部位催化基团的氨基酸残基作用。分为： Ks型抑制剂（亲和标记试剂）---具有底物类似的结构，带有一个活泼的化学基团，能对酶分子中的必需基团进行共价修饰而抑制酶活性。 Kcat型抑制剂（自杀性底物）---具有底物类似的结构，被酶催化反应后，潜在的活性基团被暴露或活化，与酶活性部位的必需基团作用而抑制酶活性。 可逆抑制作用 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等物理方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类 竟争性抑制 非竟争性抑制 反竞争性抑制 竟争性抑制： 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。 S 例：丙二酸和戊二酸对琥珀酸脱氢酶结合 但不能催化脱氢 竞争