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荞麦蛋白质提取方法比较荞麦中富含人体中必须的赖氨酸、精氨酸等必须氨基酸，营养价值很高。可以用于食品加工业，制成富含蛋白质的食品及植物类蛋白质饲料。通过碱法和盐法提取荞麦蛋白质，对蛋白质提取方法进行优选。以蛋白质提取率为标准，碱法以提取液PH，料液比，温度，及时间做单因素试验；盐法以盐浓度，料液比，温度，及时间进行单因素实验；通过正交试验对其蛋白提取工艺进行比较，选择最佳的提取方法。为荞麦蛋白质的综合利用和工业化生产提供参考和实验依据。碱法提蛋白的原理:荞麦蛋白质多为碱性蛋白质，大量的二硫键和疏水基团使蛋白质的溶解度下降，而NaOH可以破环蛋白质分子的次级键和氢键，使某些极性基团发生解离，使蛋白质分子表面有相同电荷，增加蛋白质的溶解度。盐法提蛋白的原理：利用盐溶原理（蛋白质在水溶液中，加入中性盐，如硫酸钠，硫酸铵，氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大）。提取液蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法。（荞麦蛋白质提取率=提取液中蛋白质含量/荞麦总蛋白含量X100%）第一步：以牛血清蛋白为标准溶液绘制蛋白质标准曲线，作为定量的依据，用于以后的测定荞麦蛋白质的含量。（以吸光光度值为横坐标，蛋白质含量为纵坐标，计算出其函数表达式）第二步：分别以提取液PH、料液比、温度、时间为单因素，在其他条件一定的前提下，进行单因素实验，用来确定每个单因素实验最佳提取条件。（摸索性实验）实验方法：荞麦粉——加碱液——浸提（1-5h）——3000r/min低速离心10min——取0.1ml上清液，稀释30倍——加考马斯亮蓝，测OD值，计算蛋白质含量。分别测定每个单因素实验的最佳提取条件，如PH单因素实验，确定料液比为1:15，温度40度，时间两小时，PH梯度为8、9、10、11、12进行试验。然后以PH为横坐标，提取率为纵坐标绘制曲线图。确定最佳的提取条件。如果绘制的曲线是先上升后下降或者是先上升后保持不变，那么那个转折点就是最高的提取条件。第三步，确定每个单因素的最佳提取条件，上下取三个水平，进行四因素上水平正交试验，进行九次实验，计算其提取率，计算方差和极差，用来确定哪个单因素对提取工艺的影响因素最大，并选择最佳的提取条件进行试验，计算最优提取率。盐法提蛋白的过程和碱法提蛋白相似，分别以物料比，盐浓度，温度和时间做单因素实验，并进行正交试验，选择最优的提取率。最后比较碱法和盐法的提取率，进行选择。注：（1）考马斯亮蓝原理：考马斯亮蓝中性染料，在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸结合，使染料的吸收峰位置变为595nm，同时溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。在595nm下测定吸光度值，与蛋白质的浓度成正比。（2）考马斯亮蓝注意事项：不可用石英比色皿，因染色不易洗去，可用塑料或者玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿绝不可用乙醇或者丙酮长时间浸泡。各因素对蛋白提取率的影响：料液比：料液比对蛋白提取率影响不大，随料液比增加提取率增加，达到一定程度后提取率保持不变。开始保持不变的点即为单因素下的最佳提取率。温度:随温度升高，溶液的粘度开始增大，分子运动的速度减慢，阻止蛋白质继续溶解，从而造成提取率下降。另外，温度过高，导致蛋白质变性，蛋白质沉淀使蛋白质溶解度降低，从而降低提取率。（3）时间:时间过短，荞麦蛋白质不能与碱性溶度充分接触，使蛋白质不能与纤维素成分分离；时间长，会增加非非蛋白成分与蛋白质共沉机会，降低产品质量。（4）PH：PH过高，导致蛋白质变性沉淀，降低其溶解度。并且使蛋白质色泽成深褐色，降低产品质量。（5）盐浓度：盐浓度增加到一定程度，会产生盐析现象，蛋白质溶解度降低，导致蛋白质提取率下降。并且过高的盐浓度会破坏蛋白质的结构。3.碱法提蛋白优缺点：提取率高，生产工艺简单，成本始终。但提取蛋白的色泽较差，过强的碱提取液会造成环境污染。是当前工业应用的主要方法。盐法提蛋白优缺点：提取率较低但是提取蛋白的色泽较好，不破坏蛋白的结构，营养价值较高。酶法提蛋白:成本较高且条件苛刻，不利用工业生产。4.常用蛋白质的含量测定方法考马斯亮蓝比色法，紫外分光光度法，双缩脲试剂比色法，凯氏定氮法5.其他：Southerrn blot 检测DNA Northern blot 检测RNA Western Blot 检测蛋白质.实验前景及目的：荞麦中的蛋白质含量比较丰富，并且富含赖氨酸，用于食品工业，制作成富含氨基酸的食品或者蛋白质饲料，可用于防治婴幼儿的“赖氨酸缺乏症”。并且荞麦中的蛋白质含有人体中必需的八种必需氨基酸，与鸡蛋的蛋白质含量相似。荞麦蛋白具有抗衰老，抗癌；防治高血压，冠心病；促进排泄，缓解便秘等重要的作用。以往荞麦蛋白多直接食用，或者制