重组人血清白蛋白第3结构域-Nartograstim融合蛋白在毕赤酵母中的表达及初步活性研究.pdfVIP

申明-1带 *..f 学报 Joumal of China Pharmaceutical University 2013 ,44( 6) :577 - 582 577 重组人血清白蛋白第 3 结构域-Nartograstim 融合蛋白 在毕赤酵母中的表达及初步活性研究 赵述强，张瑜，田法，刘超，高向东* (中国药科大学生命科学与技术学院，南京 21∞09) 摘要将人血清白蛋白第 3 结构域(3DHSA) 与粒细胞集落刺激因子突变体(Nartograstim )融合基因克隆至载体 pPICzaA ，直于醇氧化酶启动子(AOX) 和α 支配因子信号肤作用下构建分泌表达质粒，电击转化入毕赤酵母 GS1l 5 SDS- o PAGE 结果显示 3DHSA-Nartograstim 相对分子质量约为 42 kD ,Western blot 证实其同时具有HSA 和 G-CSF 的抗原性。建立 融合蛋白表达的条件为:BMMY 培养基pH 6. 0 ,1. 5% 甲醇、诱导 84 h ，灰皮扫描发现该条件下融合蛋白的纯度为 799毛。依 次采用亲和色谱和疏水色谱纯化得到纯度高于90% 的融合蛋白，终产量为 86 mglL。采用 MTT 法检测融合蛋白对 NFS-60 细胞株的促增殖能力，结果显示，3DHSA-Nartograstim 具有剂量依赖性促进 NFS叫60 细胞增殖的作用。本研究为 3DHSA-Nar­ tograstJ m 的进一步研究奠定了基础。 关键词 人血清白蛋白;粒细胞集落刺激因子;3DHSA; 毕赤酵母 中固分类号 Q786 文献标志码 A 文章编号 l ∞o - 5048 ( 2013 )06 - 0577 - 06 doi: 10. 11665/j. issn. 10∞-5048 Expression and bioactivity of recombinant 3DHSA-Nartograstim fusion protein in Pichia pasωris ZHAO Shuqiang , ZHANG Yu , TIAN Hong , LIU Chao , GAO Xiangdong * School 0/ L泸 Science and Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China Abstract The gene for coding the fusion protein 3DHSA-Nartograstim was cloned into pPICzαA vector along with the open reading frame of the α-factor signal under the control of the AOX promote r. The recomhinant secret expression plasmid was transformed into Pichiαpωtoris host strain 臼115 hy electroporation. The analysis of SDS- PAGE demonstrated that the relative molecular masses of 3DHSA-Nartograstim were ahout 42 kD , and the results of Westem blotting proved that 3DHSA-Nartograstim was recognized specially hy HSA