基因工程目的基因的克隆与分离鉴定2.ppt

生物技术专业核心课程 2、基因克隆 分子水平上的克隆，将某一段DNA或一个基因插入到 一个载体分子上，并导入特定的宿主细胞中，形成寄 主/载体单元，称为一个克隆。 二、cDNA法 三 PCR法 四 化学合成法 五、基因文库的构建 第二节 基因的分离 一、基于基因功能的基因分离技术 二、基于DNA插入作用的基因分离技术 三、基于基因图谱的基因分离技术 (In excess) 二、基于DNA插入作用的基因分离技术 三、基于基因图谱的基因分离技术 4、染色体步移 (Chromosome walking)： 首先构建一个基因组文库、用已知的A基因为探针，从基因 组文库中筛选出与其有同源序列的a克隆； 2、图位克隆基本程序 再用a克隆为探针从基因组文库中筛选出与a克隆有同源序列 的b克隆； 然后以此类推最后筛选出未知基因并把它分离出来。 高密度的分子标记图谱 3、要求： 与目的基因紧密连锁的分子标记 高质量的基因组DNA文库 连锁分析需要依赖特定的基因作为连锁标记，即 标记基因与待研基因之间存在连锁关系，而满足与 待研基因相连锁的基因实在太少，所以连锁分析对 克隆大多数基因存在着一定的困难。 RFLP的出现使多态性基因标记存在于整个基因组内， 解决了连锁分析中难以克服的困难。 1980年Wyman等科学家首次建立了限制酶切片段长度 多态性RFLP(restriction