植物(豆芽)吡哆胺—吡哆醛转换反应作用酶的分离纯化及表征.pdfVIP

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植物(豆芽)吡哆胺—吡哆醛转换反应作用酶的分离纯化及表征

目录 摘要I AbstractII 1 文献综述1 1.1维生素 B6简介1 1.2 植物体内 VB 的从头合成途径2 6 1.3 植物体内 VB 的补救途径3 6 1.4PM PL 4 到 转换途径作用酶 1.5PPAT的概述5 2引言6 2.1 研究的目的和意义6 2.2 研究内容6 3 材料与方法7 3.1 实验材料、仪器及试剂7 3.1.1 实验材料7 3.1.2 主要仪器和设备7 3.1.3 主要试剂7 3.2 实验方法7 3.2.1 豆芽 GOT的分离纯化7 3.2.2GOT活性的测定[57]9 3.2.3 纯化后的 GOT和不同底物的反应10 3.2.4 辅基 PLP的释放量对 GOT和不同底物反应的影响10 3.2.5 豆芽 PPAT的分离纯化10 3.2.6 豆芽 PPAT活性的测定11 3.2.7 蛋白浓度的测定12 3.2.8SDS检测酶的纯度13 3.2.9PPAT部分酶学性质的研究13 4 结果与分析15 4.1 豆芽 GOT的分离纯化效果15 4.2GOT的纯度鉴定17 4.3 纯化后的 GOT和不同底物反应的活性测定18 4.4 辅基 PLP的释放量对 GOT和不同底物反应的影响结果18 4.5 豆芽 PPAT的纯化效果18 4.6PPAT纯度鉴定21 III 4.7PPAT部分酶学性质的研究22 4.7.1 酶促反应的最适温度22 4.7.2 酶的温度稳定性22 4.7.3 酶促反应的最适 pH值22 4.7.4 酶的 pH稳定性23 4.7.5 双底物乒乓反应动力学常数的测定和底物特异性23 5 讨论25 5.1GOT的分离纯化25 5.2GOT的底物特异性25 5.3PLP辅基对 GOT在 VB6 代谢过程中影响25 5.5PPAT的最适温度、pH及其稳定性26 5.6PPAT的动力学常数26 5.7PPAT的底物特异性26 6 结论27 6.1GOT的分离纯化27 6.2GOT的底物特异性27 6.3PLP GOT VB6 27 辅基对 在 代谢过程中影响 6.4PPAT的分离纯化27 6.5PPAT的最适温度、pH及其稳定性27 6.6PPAT的动力学常数27 6.7PPAT的底物特异性28 7参考文献29 8致谢34 9作者简介35 10研究生期间发表的论文35 IV 1 文献综述 1.1维生素B (VitaminB ,VB )简介 6 6 6 VB 是一类水溶性维生素,遇光或碱易破坏,不耐高温。2-甲基-3-羟基-5-羟甲基 6 吡啶是它们共同的母体,吡啶环第四碳位被羟甲基、氨甲基、甲酰基取代后分别形成 吡哆醇(P

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