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大蒜多糖中单糖组分的毛细管电泳研究 作者：马晓丽，孟磊，孙莲，李新霞，吕成军 【摘要】 　　目的建立高效毛细管电泳法（HPCE）分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比。方法大蒜多糖样品经2 mol/L硫酸降解为单糖后，经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮( PMP)衍生化，用毛细管区带电泳(CZE)法测定单糖组成。结果大蒜多糖中葡萄糖（Glc）、半乳糖醛酸（GalUA）、鼠李糖（Rha）、甘露糖（Man）、阿拉伯糖（Arab）、葡萄糖醛酸（GlcUA）、半乳糖（Gal）的摩尔比为18.46.99∶4.21∶4.38∶3.15∶7.21∶4.99。结论该方法灵敏度高，结果准确可靠，可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制。 【关键词】 大蒜多糖； 衍生化； 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮； 毛细管电泳法 大蒜(Allium sativum)营养丰富，是日常生活中常用的香辛蔬菜和调味佳品，而且具有很强的防病治病保健功能［1］。大蒜多糖为大蒜中一类含量较高的活性组分，药理研究证明大蒜多糖具有抗氧化、抗病毒、保护心肌、防止心肌纤维化等多种重要的生物活性［2，3］，虽然大量 文献 报道了大蒜多糖的提取分离及药理作用，但关于大蒜多糖的单糖组分研究未见报道。 高效毛细管电泳法［4，5］是近年 发展 起来的一种具有高效、灵敏和低耗的分析方法，已引起药物分析界的广泛重视。本实验首次采用柱前衍生化方法，用毛细管电泳法研究大蒜多糖的单糖组成，以期为大蒜资源的开发和利用提供基础依据。 　 　1 仪器与试药 　　Beckman P/ACETM MDQ型高效毛细管电泳仪（Beckman公司，美国），二极管阵列检测器，石英毛细管柱（58.5 cm×75 μm，有效长度48.5 cm，河北永年）；FE20-pH计（METTLER TOLEDO公司）；XS205 电子 天平（METTLER TOLEDO）。 葡萄糖(glucose)、甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)、鼠李糖(rhamnose)、阿拉伯糖(arabonose)(分析纯，上海试剂二厂)；葡萄糖醛酸(glucuronic)和半乳糖醛酸(galacturonic acid，分析纯，Sigma公司)；大蒜多糖由新疆埃乐欣药业分离纯化。 　　1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)（分析纯，上海试剂二厂）；乙腈，甲醇，色谱纯；硫酸（H2SO4），盐酸（HCl），氢氧化钠（NaOH）(分析纯，西安化学试剂厂)；水为去离子水。 　　 2 方法与结果 　　2.1 电泳条件石英毛细管柱（58.5 cm×75 μm，有效长度48.5 cm）；运行缓冲液：75 mmol·L-1硼砂溶液（pH=10.50）；柱温25；电压：15 kV；压力进样0.5 Pa×20 s；检测波长245 nm。清洗程序：第1次进样前分别以甲醇、双蒸水、0.1 mol/L盐酸、双蒸水、0.1 mol/L NaOH、双蒸水、缓冲溶液冲洗毛细管20psi×3 min；每变换1次电泳缓冲液，均用缓冲液平衡至电流平稳(10 min)后才能进样测量。样品及缓冲液均在4储存，在使用前用0.45 μm微孔滤膜滤过，且临用前超声脱气处理。 　　2.2 多糖的水解精确称取大蒜多糖20.0 mg，置于10 ml具塞试管内，加入2 mol·L-1的 H2SO4 溶液2.0 ml，于100水浴中水解8 h，得水解样品溶液。用4 mol·L-1氢氧化钠水溶液中和至pH 7.0，并以纯化水稀释到5.0 ml，离心，吸取上清液，得多糖水解样品。 　　2.3 衍生物的制备 　　2.3.1 标准单糖混合液的配制分别精密称取甘露糖（Man）0.001 8 g 及半乳糖（Gal）0.003 6 g,鼠李糖（Rha）0.003 6 g，葡萄糖（Glc）0.003 9 g，葡萄糖醛酸（GlcUA）0.003 9 g，半乳糖醛酸（GalUA）0.004 2 g，阿拉伯糖（Arab）0.003 0 g，置10 ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得。 　　2.3.2 标准单糖混合液的衍生精密吸取单糖混合液50 μl，于具塞试管中，分别加入0.3 mol·L-1 NaOH 50 μl和0.5 mol·L-1 PMP甲醇溶液50 μl，涡旋混合30 s，置于70水浴反应30 min，冷却至室温，加入0.3 mol·L-1 HCl 50 μl进行中和，加入去离子水100 μl稀释混匀，然后加入1 ml氯仿涡漩混匀30 s，静置5 min，上层水相再重复萃取2次，经0.45 μm微孔滤膜滤过，进样分析。 　　2.3.3 多糖水解样品的衍生将水解后的大蒜多糖按“2.3.2”项下方法进行衍生化处理，进样时间20 s。结果见图1～2。 　　2.