生物化学19DNAreplication.pptVIP

INFORMATION TRANSFER ? 半保留复制(semiconservative replication)----当细胞分裂, DNA进行复制时，双螺旋结构解开而成为单链，用于合成新的互补链。子代细胞出现新的DNA双链，其中一股单链是从亲代完整地接受过来的。另一股单链完全重新合成，且按碱基配对原则互补。 DNA半保留复制的证据 §19.2 DNA复制的酶学 1.底物 dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP) 2.聚合酶 DNA聚合酶（DNA依赖的DNA 　　　　　　　　　 聚合酶) DNA--pol 3.模板　单链的DNA母链 4.引物　寡核苷酸引物（RNA) 5.其他酶和蛋白质因子 解链酶，解旋酶，单链结合蛋白，连接酶　　 DNA聚合酶的活性 5′至3′的聚合活性 5′→ 3′方向 核酸 外切酶活性 5′→ 3′外切酶活性 3′→ 5′外切酶活性 一、复制的化学反应 5′至3′的聚合活性（ 5′→ 3′ ）  核酸外切酶活性 3′→5′外切酶活性 5′→3′外切酶活性 二、 DAN聚合酶（DNA polymerase) (一)原核生物： pol Ⅰ 与校读，修复有关 小片段 5′→ 3′核酸 外切酶活性 大片段 （Klenow片段）聚合活性、 3′→ 5′外切活性 常用的工具酶 pol Ⅱ ：不含5′→ 3′核酸 外切酶活性 pol Ⅲ 真正起复制作用的酶 由10种亚基组成的不对称二聚体，α、ε、θ组成核心酶 聚合活性、3′→ 5′外切活性 （二）真核生物（DNA-pol）： α 与随从链的合成有关 β 核酸外切酶活性 与修复有关 γ 存在于线粒体 δ 与领头链的合成有关 ε 与校读、修复和填补缺口有关 （三）DNA聚合酶的核酸外切酶活性和复制的保真性 核酸外切酶活性和即时校读 DNA-polⅠ，Ⅱ的3′→ 5′外切酶活性 复制的保真性和碱基选择 pol Ⅲ 的ε亚基 先形成氢键，再生成磷酸二酯键 依赖四种机理 1 遵守严格的碱基互补配对规律 2 聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能 3 复制中出错时有即时校读功能 4 使用核苷酸代谢调节库 三、复制中解链和DNA分子的拓扑学变化 （一）解螺旋酶 先导链 rep蛋白 Dna B 滞后链 解链酶Ⅱ （二）DNA拓扑异构酶(解旋酶） 既能水解，又能连接磷酸二酯键 拓扑酶Ⅰ 切断DNA双链中的一股 拓扑酶Ⅱ 切断DNA双链 （三）单链DNA结合蛋白（SSB） 维持模板处于单链状态 保护单链的完整 五、 DNA连接酶（ligase） 催化两段DNA之间的连接 一 复制的起始 （一）DNA解成单链 原核生物：单向复制； 双向复制：从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制 θ复制 真核细胞染色体比较复杂，可能有多个复制起点，同时形成多个复制单位 复制叉----复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，形成在显微镜下可看到的叉状结构，称为复制叉 E.coli复制起始点oriC跨度为245bp，包含有三组串联重复序列和两对反向重复序列 （二）引发体的生成 复制过程需要引物--短链RNA 引物酶 合成RNA引物（十个bp左右），方向为5′到3′ 引物酶进入，加上解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶（DnaG蛋白）和DNA的起始复制区域形成引发体。 DNA聚合酶Ⅲ 由其β亚单位辨认引物，新链的第一个脱氧核苷酸与引物的3-OH形成磷酸二酯键，开始复制 拓扑异构酶 松弛螺旋。 复制过程中各酶和蛋白质因子的作用 二 复制的延长 原核生物为pol Ⅲ 真核生物为DNA 聚合酶α和δ，其中α与随从链的合成有关，δ与领头链的合成有关 （一）复制延长的生化过程 原核 生物复制延长的速度很快， 真核生物复制有多个复制起点， （二）复制的半不连续性和冈崎片段 前导链是连续合成的，而滞后链则是不连续合成 冈崎片段 冈崎用电子显微镜看到了DNA复制过程中出现一些不连续片段，这些不连续片段只存在与DNA复制叉上其中的一股。后来就把这些不连续的片段称为冈崎片段。 （三）滚环复制 ——低等生物如质粒，复制时采用滚环复制。 ——环状DNA双链一股先开一个缺口，5′端向外伸展，