转基因水稻潮霉素标记基因PCR检测方法的建立及其在基因水平转移研究中的应用.pdfVIP

论著 转基因水稻潮霉素标记基因!# 检测方法的建立 及其在基因水平转移研究中的应用 ， $ % $ $ ’ 沈立明 吴永宁 周萍萍 张建中 魏晓丽 （ 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所，北京 ； 中国疾病预防控制中心传染 $ ( $)))*) ( 病控制所，北京 ； 中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京 ； $))+ ’ ( $))$)$ % ( 贵阳医学院公共卫生学院，贵州 贵阳 **)))$ ） 摘 要：为建立用于基因水平转移研究，尤其是 ,-. 经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基 因 （ ）的定性和实时定量 体系，设计针对 的上游通用引物多个片段定性 !# /012340567 8/398/3:2;79=2;9= !# !# !# 扩增体系，以植物叶绿体基因 为内对照， 扩增产物经测序验证。将定性 中最小片段（ ）连接到质 $%’ !# !# ’+ 8 粒载体 8?$@ 8B, C 载体上，提取质粒经验证后做外标。应用 C;DB;7—BEF 荧光探针和引物，建立定量的外标校 正曲线法，并评价方法的精密度。建立的定性 体系能稳定扩增出 不同大小的 个 片段，并 !# ’+ 8 G H$) 8 * !# 经测序验证。实时定量 的线性范围为 * 拷贝（ ），最低能检出 拷贝，重复性好。本研究已成 !# $) G $) ( )(HH@ $) 功建立了用于转基因水稻标记基因 !# 基因水平转移研究的定性和定量 !# 系统。 关键词：植物，转基因；基因；基因水平转移；聚合酶链反应 （ ） !#$%’() %* +,- !).)/%( 012)’ *%3 45363 7( 8193%’1./( +:%2:%)35(2*352 !# /( ;35(29(/. -/. 5( =)2 $/.5)/%( ， ， ， ，