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血液分析仪及临床应用天津医科大学 检验系李秀 第一章 血液分析仪的检测原理 血液分析仪（hematology analyzer, HA）,是目前临床血液一般检查最常用的检测仪器。 20世纪40年代后期，美国人库尔特（W.H.Coulter）发明并申请了粒子计数技术的设计专利；至50年代初期，电子血细胞计数仪开始应用于临床，开创了血液分析仪的新纪元。 第一节 电阻抗法检测原理 目前，各类血液分析仪主要能完成两大功能 ①细胞计数功能。 ②细胞分类功能。血液分析仪检测原理大致分为两类：电阻抗法和光散射法。 一、电阻抗法（electrical impedance)血液分析仪检测原理 根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定，又称库尔特原理（Coulter principle） 二、仪器组成 ①脉冲信号发生器 ②放大器 ③甄别器 ④阈值调节器 ⑤整形系统 ⑥计数系统 ⑦自动控制保护系统， ⑧打印系统 三、白细胞计数和分类计数原理 根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据这些脉冲的大小，可对白细胞进行分群。 仪器可将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道（channel），每个通道为1.64fl，根据细胞大小分别置于不同的通道中，从而显示出白细胞体积分布直方图。 第一群（35～90fl）是小细胞区，主要分布的是淋巴细胞； 第二群（90～160fl）是单个核细胞区，也称作中间细胞，主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，核左移的各阶段幼稚细胞或白血病时白血病细胞。 第三群（160fl以上）是大细胞区，主要是嗜中性粒细胞 四、红细胞检测原理 （1）红细胞计数和血细胞比容测定 正常时，血液红细胞与白细胞的比例约为500:1～750:1，因此，白细胞因素可忽略不计。血细胞比容，通常用红细胞平均体积（MCV）与红细胞数相乘得到。 (2)血红蛋白测定 ICSH推荐使用氰化高铁法，HiCN最大吸收峰在540nm (3)红细胞其他参数的检测：经计算得到。红细胞平均体积（MCV）、平均血红蛋白量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC） (4)红细胞体积分布宽度（red blood cell volume distribution width,RDW），则是由血液分析仪测量细胞体积后获得的，是反映外周血红细胞体积异质性的参数，即反映红细胞大小不等的客观指标。 五、血小板检测原理 血小板（platelet, PLT）随红细胞一起在一个系统中进行检测，当各种细胞引起电阻变化，产生的脉冲经数字化后，根据不同的阈值，计算机分别给出血小板和红细胞数目。血小板分别储存于64个通道内，直方图范围在2～28fl之间。 第二节光散射法检测原理 一、 光散射法白细胞检测原理 1.激光与细胞化学法(SCC型）：应用激光散射和过氧化物酶染色技术进行白细胞计数及分类 1）过氧化物酶检测通道 2）嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道 X轴为吸光率（酶反映的强弱），Y轴为光散射（细胞大小）两个结合信号定位在细胞图上。 2.容量、电导、光散射（volume，conductivity， scatter, VCS）法： VCS技术是使血细胞在未经任何处理，保持着与体内形态完全相同的状态下得出检测结果。 测量产生的三种信号，在X、Y、Z三维空间对接近自然状态的细胞进行分析，结果更精确。 3-D VCS检测技术：①应用电阻抗原理测量细胞体积（volume, V）技术。②应用电导性技术，利用不同细胞对高频电流传导的差异测量细胞的大小、内部结构； ③应用光散射（scatter, S）技术，使细胞发生散射的特性，通过收集中间角度光散射信号，测量细胞表面结构，胞浆中颗粒的性状和核的形态等。 3.电阻抗与射频法 ①嗜酸性粒细胞检测系统 ②嗜碱性粒细胞检测系统 ③ 5种白细胞分类检测系统 ④幼稚细胞检测系统 脉冲高低代表细胞大小（DC)，为横坐标，核及颗粒的密度（RF)，为纵坐标，根据两个信号一个细胞可定位于二维的细胞散射图上。 4.多角度偏振光散射（multi-angle polarized scatter separation of white cell, MAPSS）法：一定体积的全血标本，用鞘流液按适当比例稀释后，白细胞内部结构近似于自然状态通过激光束时，可从4个角测定散射光的密度： ①0°：前角光散射（1°～3°）可粗略测定细胞大小。 ②10°：狭角光散射（7°～11°），可测定细胞