子宫内膜基质干细胞的体外分离培养及生物学特性.pdf

毕玉亮．等．子宫内膜基硬干纲匏的体外分离培养及生物学特性 一 c尺瑚 ．。 CD90highlyexpressedin500bpand150bprespectively，butdidnotexpressinthemesometrium．S—shapedgrowth curveofculturedcellswasfound．andtherewasnodifferenceinthecellcycleofcellsculturedusingthreedifferent methodsAmongthethreemethods．collagenaselmethodcouldharveslthehighestnumberofendometriaIstromal stem cellsthatgrew fatsets．ThesefindingsindicatethatendometrialstromaIstem cellscanbeSUCceSsfullyisolatedfr0m theremoveduterinetissues。andcollagenase lmethodiSanefficient，practicalandstablemethodfor门『vitrocultureof endometrialtsromaIstem cells． Subjectheadings：StemCells；Uterus；CellCultureTechniques；CellDifferentiation；TissueEngineering Citethisarticle：BiYH,TengJR．Endometnalstromalstem cells：门『vitroisolation．cultureandbiologicalfeatures． ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu．2017：21{5)：760-765． 0 引言 Introduction 技术有限公司)，PCR试剂盒(上海江莱生物科技有限公司)， 不孕症是妇科临床诊疗中较为常见的疾病，相关文献报 RT试剂盒(HL京全式金生物技术有限公司)，封固中性树胶 道显示，宫腔粘连在众多女性不孕因素中占9_2％的比例1【J， (武汉艾美捷科技有限公司)，电泳仪(上海高创化学科技有 主要发生于宫腔 内创伤后，由于过度刮宫及术后宫腔感染 限公司)，倒置显微镜(北京碧橙蓝生物科技有限责任公司)， 在一定程度上破坏了子宫内膜，进而出现闭经，严重者甚 co2培养箱(北京百普赛斯生物科技有限公司)。 至不孕。通过宫腔镜下粘连松解术可以恢复宫腔的体积及 1．4 实验方法 形态，术后放置宫内节育器、球囊、羊膜移植或者透 明质 1．4．1 标本处理 子宫全切术后，无菌操作下取子宫内膜 酸等辅助手段，在一定程度上降低了粘连的复发可能，但 组织，放入无菌的青、链霉素溶液中，2h内送入实验室。 其复发率仍居高不下4【J。子宫内膜是一种随着月经周期动 用无Ca Mgz+的PBS冲洗，转入无菌培养皿中，用眼科剪 态改变的组织，在女性的生育期大约有400个左右的周期 剪至1mm。大小 发生着再生、转化、行经的过程，属于高度再生组织。子 1．4．2 子宫内膜基质干细胞的分离培养 采用胰蛋 白酶 宫内膜分为两层，即功能层和基底层，功能层随着月经周 法、胶原酶 I法及胰蛋白酶联合胶原酶 I法进行细胞分离。 期不断地更新、脱落、再生；基底层则主要由疏松结缔组 ①胰蛋 白酶法：将新鲜剪碎的子宫内膜组织放置于0_25％ 织组成。临床研究显示，子宫内膜基质干细胞定位于子宫 的胰蛋白酶中，于37℃培养箱中振荡消化30min后，收集 肌层与子宫内膜的交界部位，子宫内膜基质干细胞具有多 消化液于离心管中，加入含有体积分数10％胎牛血清的完 向分化和高增殖的功能，子宫内膜周期性增生和脱落与子 全培养基于离心管中终止消化，以1000r／min离心10m