黑曲霉h408阿魏酸酯酶基因的克隆与在毕赤酵母中的高效表达.pdf

Ｒesearch Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 54 (8) :876 -88 1 ; 4 August 20 14 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn doi : 10. 13343 / j ． cnki． wsxb ． 20 14 . 08. 004 黑曲霉 h408 阿魏酸酯酶基因的克隆及在毕赤酵母 中的高效表达 * ， ， ， ， 周燕燕 刘新利 陈静 胡泓宇 侯运华 ， 250353 齐鲁 工业大学 食 品与生物 工程 学院 山东 济 南 : 【 】 (Pichia p astoris ) (Asp erg illus niger ) h408 摘要 目的 实现 在 巴斯 德 毕赤酵 母 中高效表达 黑曲霉 阿魏酸 酯 酶 A (A nf aeA ) ， 。 【 】 PCＲ h408 A 基 因 并对重组 酶特 性进 行表 征 方法 采 用重 叠延 伸 扩 增 黑曲霉 的阿魏酸 酯 酶 。 A nf aeA pPIC9 K ， pPIC9 K-Anfae ， 基 因 将 基 因和 毕赤酵 母表达 载 体 连接 成 功构建 重组质 粒 经 线性化后 电转 P ． p astoris GS115 ， 。 pH 化 透 明圈法筛选活性高的 转化 子后进 行 诱 导表达 利用 紫外吸收法测 定温度 及 对重 。 【 】 A ． niger h408 A cDNA 组 阿魏酸酯 酶 活 性 的 影 响 结 果 成 功 从 中 克 隆 得 到 阿 魏 酸 酯 酶 的 基 因 (GenBank : KF9 11349 ) ， P ． p astoris GS115 。 783bp ， 1 并实现了其 在 中 的高效 表 达 该 基 因长度 为 含有 个 开 (OＲF) ， 260 ，Blast GenBank 放 阅读框架 编码 个氨基酸 分 析显 示 该 基 因和 中黑曲 霉 阿魏酸 酯 酶 序