工具酶的发现和基因工程的诞生emma1.ppt

把生物的遗传物质DNA分离出来，在生物体外，通过对DNA分子进行剪切、拼接，对生物的基因进行改造和重组，然后将重组的DNA（基因）导入适当的受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需的基因产物（蛋白质、多肽、酶等）。 思考： EcoRI 假设某病毒的一段序列如下图所示，其中某部位可被限制性内切酶A识别并切割，则限制性内切酶A识别的序列为以下哪个？ CGTCATCGATGATGCAGCTC GCAGTAGCTACTACGTCGAG (A) ATGATG (B) ATCGAT (C) TGCAGC (D) CAGCTC 思考： 基因工程的基本工具 思考： 基因工程的基本工具 思考： 质 粒 练习： 练习： 有关DNA酶 基因工程的诞生 * * ?? ? 三文鱼原是西餐和日本料理的主要原料，不仅味道鲜美，而且富含有益心血管健康的奥米伽-3脂肪酸。三文鱼种类不少，在国内市场上最常见的是大西洋鲑，野生的大西洋鲑因为过度捕捞，已濒临灭绝，市场上卖的大西洋鲑99％以上是人工养殖的。 ?? ? 大西洋鲑的生长速度缓慢，第一年体重只增加20～30克，一般要养三年才能上市。因此可以给大西洋鲑转入体型最大的三文鱼——大鳞大麻哈鱼的生长激素基因。 ?? ?? 转基因鱼 剪切 拼接 导入 表达 （三）将重组DNA分子导入 （四）目的基因的检测和表达 转基因鱼的构建 （一）获得 大麻哈鱼生长激素基因 目的基因 （二）形成 大西洋鲑受精卵 受体细胞 鱼类因其产卵量大且体外受精而成为研究转基因动物的最佳入选动物 。 （外源基因） 运载体DNA+目的基因 重组DNA分子 基因工程的概念 其核心是构建重组DNA分子 广义：把一种生物的基因转入另一种生物体中，使其产生我们需要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。 （重组DNA技术） 生物体外 基因 分子水平 产生人类需要的基因产物 基因重组 操作环境： 操作对象： 操作水平： 基本原理： 工程结果： 让目的基因在宿主细胞中稳定高效地表达 操作目的： 基本过程： 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 从此大西洋鲑的身上得到了世界上从没有过的基因？ （不产生新基因，产生新物种吗？） 经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。 理论基础 DNA是遗传物质的发现 DNA双螺旋结构的确立 遗传信息传递方式(中心法则)的认定 —使来自异种生物的DNA拼接成为可能 ——使基因在异种生物 细胞内表达成为可能 基因工程的诞生 技术保障 基因工程工具 的发现和应用 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体DNA 工具酶 如何将大马哈鱼细胞内的生长素基因从它的DNA分子中切割下来？ 如何将切下来的生长素基因与运载体DNA连接起来？ 如何将重组的DNA运送到大西洋鲑细胞？ 需要切割DNA的工具（分子手术刀） 需要连接DNA片断的工具 （分子缝合针） 需要基因转移的工具（分子运输车） ——限制性核酸内切酶 ——DNA连接酶 ——基因载体 工具酶 最初从原核生物中分离，后来在酵母菌中也有发现(针对外来DNA，保护自身免受外源DNA入侵) 4000种，常用200多种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 一、限制性核酸内切酶 — “分子手术刀”（简称限制酶） 对DNA特定的核苷酸序列进行识别和切割 基因工程的基本工具 能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶 。 思考能否切割烟草花叶病毒上人们想要的目的基因？ 重播 4、作用部位： 磷酸二酯键 专一性--识别特定的序列、有特定的切点 5、作用特点： 识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 限制酶在切断DNA时，可在切口处带有几个伸出的核苷酸，他们之间碱基正好互补配对，因此称这些片断为粘性末端。 5′ 5′ 3′ 3′ 专一性--识别特定的序列、有特定的切点 回文序列 平末端：平切 粘性末端：错切 作用结果： 下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是(　　)　　　　　　　　　　　　　　　　　 A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶的活性受温度影响 C．限制性内切酶能识别和切割RNA D．限制性内切酶可从原核生物中提取 C 【答案：B】 （多选）某DNA分子中含有某限制性核酸内切酶的一个识别序列，用该限制酶切割该DNA分子，可能形成的两个DNA片段是（ ）