实时荧光定量PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立.pdfVIP

VetSci V01．29No．7 849 中国兽医学报2009年7月第29卷第7期ChinJ Jul．2009 实时荧光定量PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立 石建平1’2，孟日增2，刘 晶2，郭 娜1，潘风光¨ (1．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062；2．吉林出入 境检验检疫局，吉林长春130062) 探针，扩增片段长度为76bp。以鸭病毒性肠炎弱毒疫苗株DNA为阳性标准品模板，建立了实时荧光定量PCR检 测鸭病毒性肠炎病毒的方法。该方法能在鸭病毒性肠炎病毒DNA样本中检出荧光信号，定量范围为：2．1×109～ 2．1×100个拷贝数，最小检出量为2．1×100个拷贝；用该方法对人工感染试验的4只鸭组织器官、粪便、血液等样 品重复测定3次，病毒模板DNA的检出率为i00％，对鸭正常组织、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门茼争鸭病毒性肝炎、 鹅源禽流感H5毒株、新城疫、小鹅瘟病毒等DNA检测不出现特异性荧光信号。经过重复性和实际临床样本检验 证实。该方法真实可靠，而且从核酸提取到报告检测结果耗时不超过4h，不仅实现了对鸭病毒性肠炎的快速诊断， 也实现了对该病毒DNA由定性到定量的检测。 关键词：鸭病毒性肠炎；荧光定量PCR；标准检测方法 中困分类号：s852．65 文献标识码：A 文章编号：1005—454S(2009)07一0849一05 for enteritis Establishmentastandardreal-timePCR detectionofduckvirus rapid SHI Ri—zen92，LIU Nal，PAN Animal Jian—pin912，MENGJin92，GUO Feng—guan91。(1．Collegeof Scienceand Medicine，Jilin Veterinary University，Changchun130062，China；2．JilinEntry—Exit and Bureau 130062，China) InspectionQuarantineofPRC，Changchun and were and tOtheUL31 se— Abstract：ThespecificprimersTaqmanprobedesignedsynthesizedaccording gene availablein is76 PCR quence GenBank(EF417996)．The Real—timefluorescent assay fragmentbp．ATaq quantitative wasestablishedfordetectionofDuck VirusDNAbasedonDNAobtainedattenuatedvaccinestrain Plague copy from asa ofthetestforDEVis minimumdetectionlimit positivetemplate．Thesensitivity 2．1×100一2．1×109 copies．The is2．1 andbloodof4ducks