饲用纤维素酶活力测定方法的探讨1).pdfVIP

上海农业科技 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006 - 4 饲用纤维素酶活力测定方法的探讨 ( ) 陈海燕 　 上海市农业科学院 　201106 　　纤维素酶是一种无毒、无害、无副作用的绿色生物制剂 , 空白的制作 :取 2ml 蒸馏水代替 2ml 葡萄糖标准溶液 , 是可再生的重要资源和能源。许多实验证明 ,动物饲料中添 以下步骤同标准曲线制作。 加适量纤维素酶可提高饲料利用率 ,在促进动物生长、减少 表　标准曲线 粪便排放、改善生态环境和防治动物疾病等方面均有明显效 项　　目 1 2 3 4 5 6 7 果 ,且在很大程度上避免了因添加抗生素、激素和高铜等物 葡萄糖浓度 0 . 1 0 . 2 0 . 3 0 . 4 0 . 5 0 . 6 0 . 7 (mgml) 质所产生的负面影响 ,具有明显的经济效益和环保意义。 蒸馏水数 ml 2 2 2 2 2 2 2 饲用纤维素酶作为一种新型饲料添加剂 ,在饲料工业中 DNS 数 ml 5 5 5 5 5 5 5 应用已相当普及。但由于纤维素酶活力测定方法的多样性、 沸水浴中反应 5min 取出冷却 ,定容至 25ml O. D540 0 . 002 0 . 121 0 . 245 0 . 362 0 . 488 0 . 616 0 . 739 不准确性及测定中存在着重复性差等困难 ,给纤维素酶的测 定带来不少困扰。考虑到方法的简便性和易操作性 ,本文将 简单介绍切实可行 ,且相对简单、准确、迅速的饲用纤维素酶 ( ) 的还原糖测定方法 又称 DNS 法 。 1 　原 　理 纤维素酶能水解纤维素 ,产生纤维二糖、葡萄糖等还原 糖 ,能将 3 ,5 - 二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化 合物。反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比 ,而 还原糖的生成量又与反应液中纤维素酶的活力成正比。因 此 ,通过比色测定反应液颜色的强度就可计算反应液中纤维 素酶的活力。 图　葡萄糖浓度与吸光度的标准曲线 2 　试 　剂 5 　酶液的制备 葡萄糖溶液 10. 0mgml : 称取无水葡萄糖 1. 000g ,加水 称取酶粉 2g ,加乙酸 - 乙酸钠缓冲液 50ml 于 30 ℃培养 溶解 ,定容至 100ml 。氢氧化钠溶液 200gL : 称取氢氧化钠 箱中 ,保温 1h ,用脱脂棉过滤。用 0. 1M 乙酸 - 乙酸钠缓冲 20. 0g ,加水溶解 ,定容至 100ml 。乙酸溶液0. 1molL : 吸取冰 液配制成适当稀释倍数的测定液 ,稀释后的待测酶液中纤维 乙酸0. 6ml ,加水溶解 ,定容至 100ml 。乙酸钠溶液 0. 1mol 素酶活力最好能控制在 0. 04～0. 08Uml 。 L :称取三水乙酸钠 1. 36g ,加水溶解 ,定容至 100ml 。乙酸 - 6 　样品的测定 乙酸钠缓冲溶液0. 1molL ,p H 5. 5 : 称取三水乙酸钠 23. 14g