温针灸对兔膝骨性关节炎软骨细胞JNK信号通路及MMP-1、13表达的影响.pdfVIP

万方数据 宁夏医科大学硕士论文 摘要 温针灸对兔膝骨性关节炎软骨细胞 JNK 信号通路及 MMP- 1、13 表达的影响 摘 要 目的 观察温针灸治疗前后 MMP - 1、13 的表达，以及 JNK 信号通路中 JNK1 、2 的表达情况，探讨温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理。 方法 新西兰大耳兔 40 只，随机分为温针灸组、针刺组、模型组和空白对 照组，采用右后肢膝关节伸直位石膏固定法制备兔膝骨性关节炎模型。造模完 成后，温针灸组在鹤顶、内外膝眼予以温针灸，灸一柱；针刺组在鹤顶、内外 膝眼予以针刺，留针 15 分钟，两组均每日 1 次，6 天为一个疗程，中间休息 1 天，共治疗 2 个疗程；模型组每天在兔架上固定 15min ；空白对照组不做任何 干预，正常饲养。治疗结束后取材。参考彭太平大体观察法及 HE 染色观察膝 关节组织形态学变化；采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测造模前、 治疗前和治疗后兔血清中 MMP - 1、13 表达变化；免疫组化检测关节软骨中 MMP - 1、13 的表达变化；Western Blot 法检测 JNK1 、2 蛋白的表达变化。所有 结果均采用 SPSS17.0 统计软件进行统计分析。 结果 1、大体观察结果显示模型组关节面不光滑，无光泽，有骨赘形成，与空 白对照组比较，差异有统计学意义（P 0.05）；温针灸组关节面光滑，稍欠光 泽，表面干净，与模型组比较，差异有统计学意义（P 0.05）；针刺组关节面 欠光滑、欠关泽，无骨赘形成，与模型组比较，差异无统计学意义（P 0.05）。 2 、HE 染色结果显示：空白对照组软骨表面光滑，结构完整，软骨细胞排 列整齐，呈四层，染色均匀；模型组软骨变薄，软骨细胞数量减少，可见软骨 细胞成簇排列，排列紊乱；温针灸组软骨细胞增多，且排列整齐，软骨边缘光 滑；针刺组软骨稍欠光滑，软骨细胞偶可见成簇排列，细胞数目稍增多，排列 I 万方数据 宁夏医科大学硕士论文 摘要 较整齐。 3 、治疗前后血清中 MMP - 1、13 的表达水平比较：除空白对照组外，各组 治疗前较造模前血清 MMP - 1、13 的浓度均显著升高，差异有统计学意义(P ＜ 0.05) ；治疗结束后，模型组与空白对照组比较，血清MMP - 1、13 表达升高， 差异有统计学意义(P ＜0.05) ；温针灸组血清MMP - 1 和 MMP - 13 表达较模型组 显著降低，差异有统计学意义(P ＜0.05) ，较针刺组有降低，但差异无统计学意 义(P ＞0.05) ；针刺组与模型组比较，血清中MMP - 1、13 表达量有所降低，但 差异无统计学意义(P ＞0.05) 。 4 、免疫组化检测光学显微镜下 MMP - 1、13 表达的阳性结果分布：空白对 照组中 MMP - 1、13 只有散在的阳性表达，且表达不明显；模型组软骨细胞着 色相对较深，以棕黄色、褐色颗粒为主，且细胞外基质中也有少量着色；温针 灸组软骨细胞 MMP - 1、13 的阳性表达主要以浅棕褐色的颗粒为主，表层稍有 分布深褐色颗粒；针刺组的阳性表达较为明显，而且表层与中层颜色较深的棕 黄色颗粒分布较高。 5 、免疫组化检测关节软骨中 MMP - 1、13 的表达水平变化：与空白对照组 比较，模型组MMP - 1、13 蛋白的表达明显升高，差异有统计学意义（P ＜0.05 ）； 温针灸组与模型组比较，MMP - 1、13