自发性高血压大鼠尿液氨基酸代谢谱改变及两色金鸡菊提取物调节作用初探.docVIP

自发性高血压大鼠尿液氨基酸代谢谱改变及两色金鸡菊提取物调节作用初探 　　[摘要] 在?_证自发性高血压大鼠（SHR）模型成功后比较其与正常大鼠（Wistar）尿液氨基酸代谢谱的差异， 在此基础上初步研究两色金鸡菊提取物对SHR 血压及氨基酸代谢谱的调节作用。选取经过适应性饲养后的适龄雄性SHR大鼠和同龄Wistar 大鼠测量大鼠收缩压（SBP），舒张压（DBP）， 同时收集大鼠尿液，运用AQC柱前衍生高效液相色谱（HPLC）-荧光法测定尿液中氨基酸代谢谱， 利用多元统计分析中的偏最小二乘方判别分析（PLS-DA）研究2组动物的氨基酸代谢差异物。将所有饲养的SHR大鼠随机分成5组， 即模型组，两色金鸡菊提取物高、中、低剂量组（3.2，1.6，0.8 gkg-1），西药卡托普利组（4 mgkg-1），连续灌胃给药4周后收集大鼠尿液，测定各组氨基酸代谢谱。药物干预4周后，与Wistar组相比， SHR组的氨基酸代谢谱中丝氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸对分组的贡献较大，均显著高于Wistar组；与SHR组相比，卡托普利组的苏氨酸、蛋氨酸较模型组显著降低（P 　　[Key words] spontaneously hypertensive rats（SHRs）； amino acid profiling； HPLC； Coreopsis tinctoria 高血压是常见的心脑血管病，普遍认为它是不同原因和致病因素引起的复杂疾病，能诱发动脉粥样硬化、中风等临床表现，还可导致心、脑、肾等重要器官的损害[1]。自发性高血压大鼠（SHR）起初来自于血压正常的Wistar Kyoto鼠交配，幼鼠出世后第5周开始出现严重高血压并导致血管病变[2]。因其病程变化类似于人类原发性高血压，因此非常适合于SHR的药物干预实验研究[3] 两色金鸡菊Coreopsis tinctoria Nutt.，又称昆仑雪菊[4-5]，属菊科植物，是中国的特有植物，新疆维吾尔自治区以野生两色金鸡菊代茶饮，具有降血压、降血脂、降糖的功效[6-7]。有研究认为其效应机制可能与降低氧化应激，减少丙二醛（MDA），增加一氧化氮和?p少血管紧张素（Ang-Ⅱ）有关[8-11]。 本课题组前期对自发性高血压大鼠的代谢组学研究表 明，大鼠体内部分氨基酸代谢产物和葡萄糖等能量代谢物质明显异于正常大鼠[12-14] 本研究首次采用AQC柱前衍生高效液相色谱荧光法结合正交偏最小二乘法（PLS-DA），发现SHR与Wistar 2组氨基酸代谢谱存在明显差异，通过定量方法找出了标志性氨基酸代谢物；模型确证后对两色金鸡菊各给药组和卡托普利组的氨基酸代谢进行了综合评价，探讨金鸡菊提取物长期给药后高血压大鼠尿液氨基酸的变化情况 1 材料 无创血压计（BP-98A，北京软隆生物技术有限公司）；大容量低温离心机（TDL-5M，长沙湘仪离心机仪器有限公司）；低温离心机（KDC-2046，科大创新股份有限公司中佳分公司）；电子天平（中山市衡新电子有限公司）；分析天平（AB204-N，梅特勒-托勒德）；高效液相色谱仪，配有 2475荧光检测器（美国Waters e2695）；快速混匀器（SK-1，江苏金坛医药仪器厂）；溶剂过滤装置、pH计（Sartorius，PB-10）；水浴锅（DK-S22）；离心机（Multifuge X3R，Thermo） 新疆两色金鸡菊醇提物按照专利工艺（专利号CN201210270799）进行提取并制备成冻干粉 （乌鲁木齐三高和药业有限公司提供）；卡托普利片（中美上海施贵宝制药有限公司，批号1211031）；氨基酸衍生试剂盒（AccQFluor，美国Waters 公司），包括17种混合氨基酸对照品，2A和2B AQC粉末以及硼酸盐缓冲液；Milli-Q超低有机物超纯水机制备超纯水（Millipore USA LLC production）；冰醋酸，无水乙酸钠，甲醇和乙腈均为色谱纯 40只自发性高血压大鼠（SHR，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司），8只Wistar大鼠[雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK（京）2012-0001]；饲养环境每天光照12 h，温度为（21±2） ℃，湿度为45%～55% 2 方法 2.1 SHR模型 将11周龄的40只雄性SHR大鼠和8只同龄Wistar大鼠适应性喂养2周后，连续2 d测量大鼠血压， 选取6只SHR大鼠作为模型组，8只Wistar大鼠为空白组，同时收集2组大鼠尿液 2.2 分组及给药 将40只SHR大鼠均衡随机分为5组，即模型组、西药卡托普利组（4 mgkg-1）、两色金鸡菊醇提物低剂量组（0.8 gkg-1）、中剂量组（1.6 gkg-1）、高剂