2450MHz微波对人肝癌细胞p27mRNA表达的影响论文.docVIP

　　2450MHz微波对人肝癌细胞p27mRNA表达的影响论文 .freelRNA表达的影响，以探讨其抑制肝癌细胞存活的分子机制. 方法 转染p27基因的人肝癌细胞按微波辐照强度不同分为对照组（未辐照组）、10mTT）检测微波对肝癌细胞的抑制作用;同时用RT-PCR方法检测肝癌细胞中p27mRNA的表达，并进行灰度扫描后计算RNA的表达指数. 结果 微波辐照1h对肝癌细胞存活有明显的抑制作用，且呈剂量-效应关系.微波可以上调肝癌细胞中p27mRNA的表达.freelRNA的表达，从而抑制肝癌细胞的存活. Keyicroa，hepatocellular Abstract:AIM To observe the expression of p27mRNA in hepatocellular carcinoma cell so as to study the proliferative mechanisms of microa cell.METHODS A hepatocellular carcinoma cell strain Hz（continuous i-croachine.The cell proliferative effect ined by MTT and RT-PCR RNA in heptaocellular carcinoma cells.Positive signals icroanner.MicroRNA in a dose dependent manner.CON┐CLUSION These results indicated that the inhibitory effect of microa cells might result from up-regulating the expres-sion of p27mRNA. 0 前言 目前，手术切除虽然仍是肝癌治疗的主要方法，但各种非手术疗法（包括肝动脉栓塞化疗、乙醇注射、冷冻、激光、微波等）的作用日益突出，微波治疗被认为是一种有前途的治疗方法.因为微波辐照可使含水量丰富、微血管交换能力差的肝癌组织在极短时间内产生高达65～100℃左右的局部高温，使肿瘤组织凝固变性坏死，达到原位灭活或局部根治的目的［1-3］ .除此之外，近年的研究还发现，微波还具有抑制细胞生长，降低细胞存活率的功能［4，5］ ，但对其抑制细胞生长的机制知之甚少.研究发现p27是一种细胞周期调控的枢纽蛋白，以多种方式调节肿瘤细胞的生长［6-8］ .为进一步探讨微波与p27mRNA之间的关系，我们借助p27基因转染的肝癌细胞模型，采用RT-PCR的方法观察了2450MHz微波辐射对人肝癌细胞p27mRNA表达的影响. 1 材料和方法 1.1 材料 INE-2000转染试剂盒和G418（Gibco公司）、DEPC（Sigma公司）寡核苷酸引物合成于上海生物工程公司. 1.2 方法 1.2.1 基因转染 获得稳定转染p27基因的人肝癌细胞株. 1.2.2 微波辐照 频率2450MHz连续波，环境温度20～22℃，功率密度分别为0，10，20和30mTT法） 取对数生长期的细胞（细胞密度为1×103 ～2×104 L-1 ），接种于96孔培养板（200μL/孔）中.待细胞长成单层后，用TT20μL/孔，37℃培养箱中放置4h，终止培养，吸弃培养孔内上清液，每孔加入150μL的二甲基亚枫，震荡摇匀，在酶标仪上测各孔A490nm 值，结果以各组5孔x ±s表示.计算其对细胞存活的毒性以抑制率来反映，其抑制率（IR）的计算公式为:细胞抑制率=A（对照组） -A（实验组）A（对照组）×100% 1.2.4 肝癌细胞株中RNA提取 将对照组和微波辐照后各组细胞用胰蛋白酶消化，收集细胞，按Tri-zol kit操作说明书提取的总RNA.20g L-1 琼脂糖鉴定RNA的完整性，紫外分光光度法确定RNA的量和纯度. 1.2.5 RNA的反转录 取细胞总RNA0.8μg于20μL反应体系中进行.即RNA变性处理后加逆转录混合液（5mmol L-1 MgCl2 2μL，RNA Buffer4μL，1mmol L-1 dNTP2μL，RNasin0.5μL，AMV1μL，radom primer1μL，DEPC处理的双蒸去离子水8.5μL，模板RNA1μL）;反转录条件为30℃10min，42℃30min，99℃5min，逆转录产物置4℃待用. 1.2.6 寡聚核苷酸引物 根据p27cDNA序列设计合成了一对p27引物，其中上游引物为5’TCT GTA GTA GAA CTC GGG CAA3’，下游引物为5’AGTTCA AA