23农事学（3）第二十三讲“作物子粒粗蛋白含量测定”.pptVIP

第二十三讲 作物籽粒粗蛋白含量测定 一、实践目的 学习和掌握商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定方法。 二、实践操作 1、配制试剂 (1)硼酸-指示剂混合液配制： 溴甲酚绿0.5g、甲基红0.1g分别溶于95%乙醇中，混合后稀释至100ml。将混合指示剂与2%硼酸溶液按1：100比例混合，用稀酸或碱调节pH值为4.5，使呈灰紫色。 (2)加速剂： 分析纯五水合硫酸铜10g，分析纯硫酸钾100g，在研钵中研磨，仔细混匀，过40目筛。 (3)30%过氧化氢-硫酸混合液(简称混液)配制： 30%过氧化氢、硫酸、水的比例为3：2：1，即在100ml蒸馏水中慢慢加入200ml浓硫酸，待冷却后，将其加入300ml30%过氧化氢，混匀。 2、试样的选取和制备 选取有代表性的种子(带壳种子需脱壳)挑拣干净，按四分法缩减取样，取样量不得少于20g。将种子放于60～65℃烘箱中干燥8h以上，用粉碎机磨碎，95%通过40目筛，装入磨口瓶备用。称取0.1g试样2份(含氮1～7mg)，准确至0.0001g，同时测定试样的水分含量。 3、消煮 (1)将试样置于25ml凯氏瓶中，加入加速剂粉末。除水稻为1g外，其他均为2g。然后加3ml浓硫酸，轻轻摇动凯氏瓶，使试样被硫酸湿润。将凯氏瓶倾斜置于电炉上加热，开始小火，待泡沫停止后加大火力，保持凯氏瓶中的液体连续沸腾，沸酸在瓶颈中部冷凝回流。待溶液消煮到无微小的碳粒并呈透明的蓝绿色时，谷类继续消煮30min，豆类继续消煮60min。 (2)将试样置于50ml凯氏瓶中，加入0.5g加速剂和3ml混液，在凯氏瓶上放一曲颈小漏斗，倾斜置于电炉上加热。开始小火，保持凯氏瓶中液体呈微沸状态，5min后加大火力，保持凯氏瓶中的液体连续沸腾。消煮总时间，水稻、高梁为30min，其他均为45min。 4、蒸馏、消煮液稍冷后加少量蒸馏水，轻振摇匀。移入半微量蒸馏装置的反映室中，用适量蒸馏水冲洗凯氏瓶4～5次。蒸馏时将冷凝管末凋端插到盛有10ml硼酸-指示剂混合液的锥形瓶中，向反应室中加入40%Na2OH溶液15ml，然后通蒸气蒸馏。当馏出液体积约达50ml时，降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min。用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶中。 5、滴定： 谷类以0.02mol/L、豆类以0.05 mol/L盐酸或硫酸标准溶液，滴定至锥形瓶内的溶液由蓝绿色变成灰紫色为终点。 用0.1g蔗糖代替样品作空白测定，消耗酸标准溶液的体积不得超过0.3ml。 6、测定结果的计算 粗蛋白质%(干基)＝140 [(V2-V1)×N×K]]/[W×(100-X)] 式中：V2 滴定试样时消耗酸标准溶液的体积(ml)；V1 滴定空白时消耗酸标准溶液的体积(ml)； N 酸标准溶液的摩尔浓度(mol/L)； K 氮换算成粗蛋白质的系数； W 试样重量(g)； X 试样水分含量。 三、作业 1、测定几种粮食作物的粗蛋白含量， 比较分析测定结果。 * * 农事学实践教程（3） 北京农学院植物科学技术系 *