第三章 液相色谱法.pptVIP

4.2.5. 尺寸排斥色谱size- exclusion chromatography 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 * M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * 4.2.6. 亲和色谱 Affinity chromatograph 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 * 以无机、特别是无机阴离子混合物为主要分析对象, 在七十年代出现、八十年代迅速发展。 传统离子交换色谱存在着两个难于解决的问题： (1)需要高浓度淋洗液洗脱且洗脱时间很长； (2)洗脱后的组分缺乏灵敏、快速的在线检测方法。 4.3 离子色谱法 * 1. 离子色谱法原理 离子交换原理，与传统离子交换的不同点： 采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相； 细颗粒柱填料，高柱效；采用高压输液泵； 低浓度淋洗液或本底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱来消除淋洗液的高本底电导）； 可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物； 各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。 * 离子色谱连续抑制装置图 * 4． 离子色谱的应用 阴离子分析: 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/hr。 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在3～50 ppm。 * 1.概述 超临界流体：在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介于液体和气体之间。 超临界流体色谱(SFC)，80年代快速发展，具有液相、气相色谱不具有的优点: （1）可处理高沸点、不挥发试样； （2）比LC有更高的柱效和分离效率。 4.4 超临界色谱 (SFC) Supercritical Fluid Chromatograph * 2. 超临界流体性质 （1）性质介于液体和气体之间; 具有气体的低黏度、液体的高密度，扩散系数位于两者之间。 （2）可通过改变超临界流体的密度（程序改变）调节组分分离（类似于气相色谱的程序升温，液相色谱中的梯度淋洗）。 超临界流体的密度与压力有关。 * 3.原理 SFC的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3 SFC的固定相：固体吸附剂（硅胶）或键合到载体（或毛细管壁）上的高聚物；可使用液相色谱的柱填料。填充柱SFC和毛细管柱SFC。 分离机理：吸附与脱附。组分在两相间的分配系数不同而被分离。 通过调节流动相的压力（调节流动相的密度），调整组分保留值。 * 程序升压 * 1.结构流程 * 2.主要部件 （1）SFC的高压泵 无脉冲的注射泵；通过电子压力传感器和流量检测器，计算机控制流动相的密度和流量； （2）SFC的色谱柱和固定相 可以采用液相色谱柱和交联毛细管柱； SFC的固定相：固体吸附剂（硅胶）或键合到载体（或毛细管壁）上的高聚物；专用的毛细管柱SFC； * （3）流动相 SFC的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3 CO2应用最广泛；无色、无味、无毒、易得、对各类有机物溶解性好，在紫外光区无吸收；缺点：极性太弱；加少量甲醇等改性； （4）检测器 可采用液相色谱检测器，也可采用气相色谱的FID检测器 * 蜂皇浆中壬烯双酸的分析—LC ◆ 说明 蜂皇浆作为食品和中药已广为人知，但其中的10—羟基—δ—壬烯双酸(10-HDA)是蜂皇浆中的特有成分，它的含量和检查方法是蜂皇浆组成基准中的重要项目。它的分析例如下所示。 ◆ 前处理法 采取一定量的试样，加蒸馏水混合溶解，加一定量的内标(安息香酸/甲醇)后，用0.45μm的一次性过滤器过滤。 * ◆ 分析条件： 柱 ：STR ODS-II(4.6mmΦ×150mm) 流动相 ：10mM磷酸钠缓冲液/甲醇=55/45(V/V) 流量 ：1.0mL/min 温度：40℃ 检