大豆异黄酮的测定方法研究论文.pdfVIP

中国粮油学会第五届学术年会论文选集 247 大豆异黄酮的测定方法研究 孟橘倪芳妍． (国家粮食储备局西安油脂科学研究设计院，西安710082) 摘要在比较了现有大豆异黄酮的检测方法的基础上，建立了一套简便、快捷、高准确度、高灵敏度 并能长期用于日常大豆异黄酮测定的方法。采用色谱柱，柱温40℃，以甲醇一冰醋酸水溶液为流动相，在 1．0mL／min的流速，在254nm紫外检测器进行检测，其重复测定结果的相对标准偏差均小于5％，人员之间 相对标准偏差均小于2％，适用于大豆异黄酮的测定。 关键词 大豆异黄酮测定HPLC法 大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次生代谢产物，具有抑制肿瘤生长、降低心血管疾病、预防和治疗 骨质疏松以及缓解妇女更年期综合症等多种生理保健作用。大豆异黄酮开发的产品已在国外广泛应用，国 内也越来越受到重视，一些大的制药厂和保健食品厂陆续加入大豆产品的研发行列。天然大豆中含有的大 豆异黄酮主要包括6种成分，包括：大豆甙、大豆甙元、染料木甙、染料木素、黄豆黄甙及黄豆黄素等。 国内外研究大豆异黄酮的测定方法主要有高效液相色谱法、高效液相色谱一质谱联用法、毛细管电泳 法及紫外分光光度计法。高效液相色谱一质谱联用法、毛细管电泳法仪器价格昂贵，很难普及，紫外分光光 度计法的精确度又很难达到要求。高效液相色谱法主要采用梯度洗脱，紫外或二极管阵列检测器测定，是 目前主要的检测方法。 1 材料与方法 1．1试验材料 大豆异黄酮粉(厂家提供)，含量150％。 1．2试验仪器 1100)； 1．2．1高效液相色谱仪(Agilent 1．2．2进样器：0—20止； 1．2．3超声波清洗器； 000 1．2．4离心机3r／min。 1．3试验方法 1．3．1高效液相色谱参考条件 intox150 1．3．1．1色谱柱：C18柱3．9 mm； 1．3．1．2流动相：甲醇一冰醋酸水溶液，冰醋酸水溶液浓度1．8％(v／V)； 1．3．1．3检测器：紫外检测器；254nrn； 1．3．1．4色谱柱温度：40oC； 1．3．1．5进样量：10 u-L。 1．4试样制备 1．4．1标准溶液的制备 标准储备液：准确称取标准物质大豆甙、染料木甙、黄豆黄甙、大豆甙元、染料木素及黄豆黄素各 0．0250 mL，此时浓度为500 g，分别用80％乙醇溶液溶解，定容至50 t,g／mL。 248 中国粮油学会第五届学术年会论文选集 mL的混合标样，使各标样的浓度均为 标准使用液：分别准确量取标准储备液各lmL，配制成10 50 ue／mL。 1．4．2样品制备 mL，用超声波振荡助溶10min，使样品充分溶解后， 称取(5±0．5)IIlg试样，加80％乙醇溶解，定容至10 000 用高速离心机在3 r／min离心5min，取上清液用针头过滤器(0．45肿)过滤后，即为试样溶液。 2 结果与分析 2．1试验条件的选择 2．1．1色谱柱的选择 在长期进行检测时，要选择稳定，不易损坏的色谱柱。在比较各文献中的方法以及对各个检测机构、生 产厂家进行了解，目前大豆异黄酮测定方法中最常用的色谱柱是C18柱，因此本次试验选择C18柱。 2．1．2检测波长的选择 nm下测定 检测波长的选择参考各文献，比较了245、254、260nln等几个不同波长的峰，结果表明：在254 灵敏度和各个峰的吸收值均较高。因此，采用254nln作为检测波长。 2．1．3流动相的选择 流动相的选择要在可以使样品分离的基础上，选择能保护色谱柱，延长仪器寿命，价