嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的基因表达调控机制分析.pdfVIP

2010年11月 中国粮油学报 V01．25，No．11 ofthe OilsAssociation NOV．2010 第25卷第11期 Journal ChineseCerealsand 嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的基因表达调控机制分析 陈士华1 吴兴泉1 张 慧1 曹 健2 (河南工业大学1，郑州450001) (中原工学院2，郑州450007) 摘要对嗜酸乳杆茵亚油酸异构酶基因的启动子区进行了定位，证明该基因为单顺反子结构。分析该 酶的代谢途径证明亚油酸异构酶单独处于一条分支途径，无其他的酶与之协同作用。分析四种乳酸茵亚油酸 异构酶基因的上游调控区，发现了12个保守住点，可能在亚油酸诱导基因表达调控中起重要作用。确定该蛋 油酸异构酶的密码子偏好性与大肠杆菌的存在一定差异，可能影响亚油酸异构酶基因的表达，并提出了改造 方案。 关键词嗜酸乳杆菌 亚油酸异构酶基因表达机制 中图分类号：Q7l 文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2010)11—0062—04 亚油酸异构酶可催化亚油酸转化为共轭亚油酸 亚油酸的诱导，表达效率较低，但其原因尚未探明， linoleic acid，CLA)，而共轭亚油酸是近而且关于该酶基因的表达调控机理的研究报导极 (Coniugated 年来新发现的一种功能性脂肪酸，是具有共轭双键 少，为此开展了本项目研究。 的十八碳二烯酸的统称。研究表明，CLA具有诸多 的生理功能，如抗癌、抗动脉粥样硬化、抑制脂肪积 1 分析方法 累、促进生长、激活免疫等。目前，利用化学异构法 1．1乳酸菌亚油酸异构酶基因转录区的定位及序 制备可食用的达到营养要求的共轭亚油酸产品很困 列分析 难，且成本高、价格昂贵，而利用生物技术方法(即利 利用已克隆的嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因序 用亚油酸异构酶转化法)生产CLA产品完全可以克 服这些缺点，且生产出的共轭亚油酸组成单一，能够 检索获得嗜酸乳杆菌全基因组序列及该基因的位 达到食品级保健食品的要求¨。5J。 置。然后确定该基因上、下游序列，利用NNPP软件 亚油酸异构酶可将双键在C一9和C一12位上 分析启动子位置。采用同样方法获得罗伊氏乳杆 的亚油酸(LinoleicAcid，LA)特异的转化为双键在 菌、植物乳杆菌、疮疤丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因 C一10和C—12或C一9和C一1l位上的共轭亚油 上游调控区，通过Clustal软件对四种乳酸菌亚油酸 酸№J。Lin等[71对嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、德 异构酶基因上游调控区进行序列比对分析。 氏乳酸乳杆菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌等菌株所产 1．2信号肽与跨膜结构分析 亚油酸异构酶的研究证明：嗜酸乳杆菌亚油酸异构 采用SignalP软件对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶蛋 酶转化LA为CLA的产率最高，因此，嗜酸乳杆菌亚白质序列中信号肽的位置及切割位点进行预测，选 油酸异构酶引起了很多学者的关注。目前，关于嗜 Proteomics 择ExPASy 酸乳杆菌亚油酸异构酶的发酵生产、分离纯化、酶学