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胆碱能受体激动剂逆转天疱疮棘层松解的机制研究
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·论著·
胆碱能受体激动剂逆转天疱疮
棘层松解的机制研究
李志量张洁尘徐浩翔杨永红冯素英 王宝玺
【摘要】 目的研究胆碱能受体激动剂对天疱疮棘层松解的逆转作用及其机制。方法将HaCaT细胞与
寻常型天疱疮IgG(PV—IgG)共培养建成天疱疮细胞模型后，再加入胆碱能受体激动剂卡巴胆碱共培养，以Pv—
IgG诱导的天疱疮细胞模型作为对照，通过细胞解离实验定量分析卡巴胆碱对棘层松解的逆转情况，用免疫荧
光方法定性观察桥粒蛋白变化；分别用RIPA和TritonX一100裂解细胞，得到总蛋白和胞质蛋白，用蛋白免疫印
迹灰度值定性分析HaCaT细胞表面与黏附相关的桥粒芯蛋白3(Ds93)、桥斑珠蛋白(PG)的变化，不同时间点
p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化水平；用定量聚合酶链反应(qPCR)
检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化；通过免疫共沉淀方法定性分析Ds93与PG相互作用的变化情
疫荧光实验发现，卡巴胆碱可以逆转PV—IgG所致的桥粒分子内化。在天疱疮细胞模型中，细胞总的Ds93和PG
含量下降，非桥粒部分的Ds93下降，非桥粒PG含量增加，且Ds93与PG的相互作用减弱，加入卡巴胆碱后可逆
转上述变化。卡巴胆碱也可使Ds93
MAPK磷酸化无明显影响。结论胆碱能受体激动剂卡巴胆碱具有
巴胆碱可以抑制EGFR磷酸化，而对p38
逆转棘层松解的作用，这种逆转作用的机制可能包括：抑制Ds93和PG内化并增加其表达，增强Ds93与PG的
相互作用，抑制棘层松解关键信号EGFR的磷酸化。
【关键词】天疱疮；胆碱能激动剂；皮肤棘层松解；桥粒芯糖蛋白质3；1连环素；HacaT细胞
of in a
Mechanismsthereversal
underlying acantholysispemphigusbycholinergicreceptoragonist／AZhiliang,
of
ofDermatology,ChineseAcademy
ZhangJiechen，XuHaoxiang,Yangronghong,FengSuying,WangBaoxi．Hospital
forSkinDiseasesand
MedicalSciencesand UnionMedical ofMolecular
KeyLaboratory Biology
Peking College；Jiangsu
210042，China
S孤，Nanjing
Correspondingauthol哥WangBaoxj．Email：wangbx@ncstdlc．org；FengSuying,Email：[engsuyin920lO@aliyun．com
【Abstract】 Toevaluatethereversaleffectofa on in
Objective cholinergicreceptoragonistacantholysis
to itsmechanism．MethodsHumanHaCaT wereco—culturedwith
pemphigus．andinvestigate keratinocyte
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