第6章：细菌的遗传分析.pptVIP

第六章 细菌的遗传分析 第一节细菌的一般特点 细菌细胞结构模式图 细菌细胞结构解析图 5、细菌的染色体 6、细菌的繁殖方法 二：E. coli 的突变型及筛选 2、测定突变的方法──影印法 3、细菌的遗传重组方式 三、细菌的质粒 3、重要的质粒 第二节：大肠杆菌的性因子和接合 大肠杆菌的遗传重组现象图示 二、前述遗传重组的特点 2、接合过程是一种单向转移遗传物质的过程 三、F 因子 从F+到Hfr的整合过程 四、细菌的结合示意图 五、细菌重组的特点 六：中断杂交与基因重组 2、实验原理 3、中断杂交实验结果 4、根据中断杂交实验结果绘制遗传图 5、环状连锁图 ⑵、不同Hfr菌株的F因子插入位点 6、重组作图 结合的两基因间重组频率 2、F`因子的特点 二、性导 第四节、转化 4、转化过程中外源DNA的摄取 5、影响大肠杆菌转化的因素 二、用枯草杆菌进行转化和重组试验 2、转化枯草杆菌三个基因的连锁图 第五节、转导（transduction） 3、普遍性转导 ⑵、测定细菌基因间的连锁关系 ⑶、三个基因间连锁关系的测定结果 （4）、通过共转导计算两基因间的物理距离(d) 4、特殊性转导:由温和噬菌体进行的转导 由温和噬菌体进行的转导最后两步 大肠杆菌精细染色体图 1963年 E.Coli 遗传图 1、转化的概念: 某些细菌通过细胞膜摄取周围来自供体的外源DNA片段,并将其通过重组过程整合到自己基因组内的过程。外源DNA片段的导入方法很多。 一、转化（transformation） 2、转化实验由来已久：1928年格里费斯（Griffith F.）在肺炎双球菌中发现转化现象。1944年阿委瑞（Avery O.T.）进行肺炎双球菌转化试验；证实DNA是遗传物质供体DNA与受体细胞间的接触与互作。 3、转化实验仍在发挥重要作用 基因操作技术离不开的转化实验(酵母菌） ⑴. PCR产物的克隆鉴定、原核表达?转化大肠杆菌 ⑵. 基因功能研究?酵母菌双杂交?转化酵母菌 ⑶. 研发转基因动物、转基因植物等 ? 需要转化 ⑷. 基因功能研究?基因扣除法 ? 需要转化 ⑴.穿入的DNA分子结合在接受座位上(可逆)，或被DNA酶降解；接受座位饱和性DNA摄取(不可逆)，不受DNA酶破坏。穿入后，由外切酶或DNA移位酶降解双链中的一条链。 ⑵.剩下的单链按各个位点与互补的受体DNA片段联会。亲缘关系越远，联会越小、转化的可能性越小。 ⑶.整合过程就是DNA重组过程，具有同源DNA特异性。 ⑴、影响转化的因素包括： ①.片段大小:肺炎双球菌的成功转化，需要外源DNA片段至少800bp,枯草杆菌最少需要16kb ②.片段形态:用于转化的外源DNA片段必须是双链 ③.片段浓度:每个细胞摄取的DNA分子数≤10个 ④.受体细胞生理状态；感受态。 ⑵、受体的生理状态 活跃合成的蛋白质可使细菌细胞壁易于接受转化DNA,所以感受态是细菌处于生长周期的某一特定时间段、最能摄取外源DNA而被转化的细胞状态。 具体讲，感受态是处于刚停止DNA合成、而蛋白质合成正在继续活跃地进行时的状态。 常用的大肠杆菌感受态细胞有热击转化用感受态和电击转化用感受态两种类型。 1、紧密连锁的基因可以通过转化进行作图 trp2+ his2+ tyr1+ × trp2? his2? tyr1? ↓ 1180 107 2600 418 685 3660 11940 数目 - + - - + + + tyr1 + - - + - + + his2 + + + - - - + trp2 转 化 子 类 型 基因座 trp2+ his2+ tyr1+(供体) × trp2– his2– tyr1–(受体) 的转化子统计 共转化率: his2 tyr1 ＞ trp2 his2 ＞ trp2 tyr1, 即his2在中间。 trp2-his2重组率 = ───────── × 100% 重组型数 亲型数 + 重组型数 – – – trp2 + his2 + tyr1 + – – – trp2 + his2 + tyr1 + – – – trp2 + his2 + tyr1 + – – – trp2 + his2 + tyr1 + – – – trp2 + his2 + tyr1 + – – – trp2 + his2 + tyr1 + trp2 + his2 + tyr1 + – – – 1180 107 2600 418 685 3660 11940 数 目 - + - - + + + tyr1 + - - + - + + his2 + + + - - - + trp2 转 化 子 类 型 基 因 座 trp2+ his2+ tyr1+(供体) × tr