维生素C二步发酵营养组学的研究.pdfVIP

摘 要 生物发酵是一个细胞与营养环境不断相互作用的过程，它们之间的作用使得 营养物质传递到胞内，进而产生一系列生理生产特性。因此营养环境对生物发酵 的产率和稳定性具有重要影响。 本研究运用过程分析技术（PAT ）策略，试图对维生素C 二步发酵进行营养 组学研究。基于GC-TOFMS 和ICP-AES 建立了玉米浆中化学成分和元素的检测， 分离鉴定了 56 个化合物和 10 种元素，运用正交偏最小二乘判别分析法 （OPLS-DA ）筛选得到17 个潜在质量标志物。通过外加发酵实验，确定了包括 丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甘氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、天冬氨酸和丝 氨酸在内的9 个氨基酸能协同促进2-KLG 的积累。 采用主成分分析（PCA ）和偏最小二乘法（PLS ）分别对工业生产中不同批 次的玉米浆进行模式识别。PCA 分析显示样本可以分为五类，其中批次 3 单独 聚为一类，主要的差异标志物有乳酸、磷酸、柠檬酸、甘油、脯氨酸、葡萄糖、 半乳糖和果糖。运用PLS 提取了与2-KLG 产率密切相关的X 变量的差异，获得 4 个主成分，构建了玉米浆的质量预测模型，能有效预测73.2% 的Y 变量，预测 相对标准偏差为6.7% 。通过模型发现玉米浆批次3 有较大偏离。 基于本实验室的酮古龙酸杆菌（Ketogulonigenium vulgare ）和巨大芽孢杆菌 （Bacillus megaterium ），通过混菌传代培养使得2-KLG 的产率得到提高。为了 阐释混菌传代的作用机制，对种子培养基和发酵培养基中的不同传代时间的 K. vulgare、B. megaterium 和混菌的发酵过程进行了营养组学研究。研究发现在种 子培养基中随着传代时间的延长，K. vulgare 降解蛋白的能力增强，B. megaterium 能够提供更多的赤藓糖和赤藓糖醇促进K. vulgare 的生长和产酸，并且抗逆性能 力提高，两菌相互作用得到强化。在发酵培养基中随着传代时间的延长，K. vulgare 的生长代谢更为旺盛且逐渐趋于稳定，进化后的B. megaterium 能提供更 多的营养物质给K. vulgare ，150 代混菌相互作用得到强化，糖酸转化率达到最 高。 这些研究为维生素C 工业生产原料的可控性和混菌传代培养促进2-KLG 积 累的作用机制提供了信息，为实现稳定、高产的工业生产提供了理论指导。 关键词：Vc 二步发酵 玉米浆 质量标志物 混菌传代培养 营养组学 过程分析技术 ABSTRACT Bio-fermentation is a process of continuous interaction of cells and nutrient environment. The interaction makes nutrients deliver to the intracellular, causing a series of physiological characteristics. Therefore, nutrient environment plays an import influence on the productivity and stability in the fermerntation. In the study, a process analytical technology (PAT) was applied to nutriomics in the second step of Vintamin C fermentation. The fifty-six compositions and ten elements of CSL were determined by gas chromatography with time-of-flight mass spectrometry (GC-TOFMS) and inductively coupled plasma-atomic emission spectroscopy (IC