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丝素蛋白纳米羟基磷灰石复合材料制备及与脊柱的融合 宁 旭，庄 勇，刘 淼，张 皓，黄明智(贵州医科大学附属医院骨科，贵州省贵阳市 550001) 引用本文：宁旭，庄勇，刘淼，张皓，黄明智. 丝素蛋白纳米羟基磷灰石复合材料制备及与脊柱的融合[J].中国组织工程研究，2017，21():221-226. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.02.011 ORCID: 0000-0002-7363-3744(宁旭) 文章快速阅读： 文题释义： 丝素蛋白：是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白，含量占蚕丝的70%-80%，含有18种氨基酸，其中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和丝氨酸(Ser)约占总组成的80%以上。丝素本身具有良好的机械性能和理化性质，如良好的柔韧性和抗拉伸强度、透气透湿性、缓释性等，而且经过不同处理可以得到不同的形态，如纤维、溶液、粉、膜以及凝胶等。 羟基磷灰石：是人体骨骼组织的主要无机组成成分。植入体内后，钙和磷会游离出材料表面被身体组织吸收，并生长出新的组织。有研究证明羟基磷灰石的晶粒越细，生物活性越高。牙齿表面的珐琅质的主要成分亦是羟基磷灰石。 摘要 背景：文献报道，丝素蛋白能作为无机物矿化模板，可以诱导羟基磷灰石晶体生长，与纳米羟基磷灰石复合能模拟天然骨组织中的无机、有机成分弥补纳米磷灰石的不足，有望成为最理想的骨移植修复材料。 目的：分析丝素蛋白/纳米羟基磷灰石复合材料制备方法及在脊柱融合中的实验性效果。 方法：①以丝素蛋白、钙磷溶液为原始材料根据共沉淀法合成丝素蛋白/纳米羟基磷灰石复合材料，模拟骨组织的结构与成分，利用透射电镜、X射线衍射分析材料晶相组成、微观结构；②利用体外细胞培养技术将成骨细胞移植在复合材料上，倒置显微镜下观察细胞黏附及增殖情况。建立新西兰大白兔腰椎后外侧脊柱融合模型，将其分为对照组和复合材料组，对照组采用自体骨移植，复合材料组植入丝素蛋白/纳米羟基磷灰石复合材料，比较两组大体观察、影像学观察及组织学观察了解成骨及脊柱融合情况。 结果与结论：①丝素蛋白/纳米羟基磷灰石复合材料在透射电镜下呈束状纳米纤维，长度在200-500 nm之间，宽度在20-30 nm之间。而羟基磷灰石长度200 nm之间，宽度50 nm之间；②X射线衍射下复合材料衍射峰底部相对较宽，峰形不尖锐，复合材料中虽含有丝素蛋白，但不会对羟基磷灰石结果产生影响；③电镜下观察：接种2 d后细胞黏附在材料孔壁上，细胞生长良好；培养5 d扫描电镜可见细胞覆盖大部分材料孔壁生长，细胞未多角形、圆锥形、椭圆形，细胞存在明显的分裂相；④第3代MC3T3-E细胞前3 d生长趋于上升趋势，第3天后其生长呈现下降趋势；X射线下L5/6横突融合部位融合坚固，融合范围存在非骨性融合；同时，X射线下复合材料部位可见明显的新生骨；⑤苏木精-伊红染色下复合材料部位可见大量细胞聚集，软骨周围存在大量的成骨细胞，并且周围的骨组织排列相对规则，复合材料内可见骨小梁形成，结构不规则，部分骨小梁出现髓腔结构；⑥结果提示：以丝素蛋白、钙磷溶液为原始材料合成的丝素蛋白/纳米羟基磷灰石复合材料能在结构、组成上与天然骨相仿，用于兔腰椎后外侧融合模型中能取得预期的骨融合效果。 关键词： 生物材料；骨生物材料；丝素蛋白；纳米羟基磷灰石；复合材料；制备方法；脊柱融合；实验性效果；透射电镜；X射线衍射；体外细胞培养技术；脊柱融合模型 主题词： 丝素蛋白；羟基磷灰石类；骨组织；骨移植；组织工程 基金项目： 贵州省科技厅[黔科合LH字[2014]7111],项目名称：椎体成形术的临床研究 Preparation of silk fibroin/nano-hydroxypatite composite scaffold and its treatment outcomes in spinal fusion Ning Xu, Zhuang Yong, Liu Miao, Zhang Hao, Huang Ming-zhi (Department of Orthopaedics, the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550001, Guizhou Province, China) Abstract BACKGROUND: Silk fibroin, as an inorganic mineralization template, can induce hydroxyapatite crystal growth, and combined with nano-hydroxyapatite can simulate the inorg