microRNA-709负性调控线粒体功能参与肾小管上皮细胞损伤.pdfVIP

中华实用儿科临床杂志2015 年5 月第30 卷第9 期 Chin J Appl Clin Pediatr ,May 2015 ,Vol. 30_!_Nι9 .711 . ·实验研究· microRNA-709 负性调控线粒体功能参与 肾小管上皮细胞损伤 倪佳佳郭燕杨玲云五荣林加娟丁桂霞张爱华黄松明 [摘要] 目的 探讨 microRNA-709 ( miR-709 )在顺铅引起肾小管上皮细胞损伤模型中的作用及机制。方 法 体外培养小鼠肾小管上皮细胞.予不同浓度(0 、 L5 、 10 、20μmoνL)顺锦刺激24 h ，以 10μmoVL 顺钳剌激 不同时间(0 ，2 、6 、 12 、24 h) 。采用实时荧光定量PCR( RT-PCR) 技术检测细胞miR-709 的表达变化。实验组分 为上调对照组、miR-709 过表达组、下调对照组、miR-7ω 下调组，其中 miR-709 下调组和下调对照组加顺销剌 激。应用 Annexin V-F町ClPI 双染法检测细胞凋亡，分光光度法检测含半眈氨酸的天冬氨酸水解酶(Caspase-3 ) 活性，Westem blot 法和 RT-PCR 检测上皮细胞标志蛋白 E-cadberin 及其 mRNA 的变化。 JC-l (线粒体膜电位) 荧光探针检割线粒体膜电位，流式细胞术检测线粒体超氧化物(mitoSOX) 生戚，PCR 检测线粒体基因(mtDNA) 拷贝数。结果 miR-709 在 5μmoνL JI阪铀刺激小管上皮细胞后开始明显升高(F = 22. 17 , P 0.0日， 10 μmoVL 顺铀剌激12 h 开始明显升高(F =33. 462 ,P 0. 05) ;过表达 miR-7ω 后细胞凋亡数目、Caspase-3 活性 较上调对照组增加，E-cadherin 表达较上调对照组 F降，差异均有统计学意义(凋亡: 1. 54 :t O. 20 比1.∞± 0.23; Caspase-3 活性: 1. 27 :t O. 08 比0.97 :t 0. 08 ;E-cadherin:O. 47 士 O. 15 比1.∞士O.IO;t = -3.086、 -5.882、 5.671 ， P 均 0.05) ;线粒体功能指标钱粒体膜电位、mtDNA 拷贝数较对照组降低，mitoSOX 生成较对照组增 加，差异均有统汁学意义(JC-I : 0.80 :t O. 04 比1. 05 :1: 0. 08;mtDNA:0. 58 土 O. 15 比l.∞土 O. 75; mitoSOX: 1. 31 :1: 0.16 比1.∞主0.05; t = 4. 687 、4.943 、 -3.694 ， P 均0.05) 。而顺铀剌激后，miR-709 下调组细胞凋亡 数目、Caspase-3 活性较下调对照组降低，E-cadherin 表达较下调对照组增高，差异均有统计学意义(凋亡: 1. 35 :1: 0.10 比1. 86 主0.44:Caspase-3 活性:1. 04 主 0.12 比1. 30 主 O. 09:E-cadherin:O. 86 土 0.08 比0.54 土 0.05: F=18.489 、 20.932 、33.323 ， P 均 0.05):线粒体膜电位、m由NA 拷贝数较对照组增加，mitoSOX 生成较下调对 照组降低，差异均有统计学意义(1C-I:0.94 土 0.06 比 0.75 ::t: O. 05: mtDNA:O. 68 :t 0.09 比 0.27 :t O. 12: mitoSOX:0.91 :t 0. 09 比1. 22 士0.08;F =2 1. 726 、59.330 、23.813 ， P 均 0.05) 。结论 miR-709 可能通过负性 调控线粒体功能参与顺铅引起的肾小管上皮细胞损伤。 [关键词l 顺铅;线粒体功能:microRNA-7佣;肾小管上皮细胞损伤 Negative regulation of microRNA - 709 in mitochondrial 阳nction 阳rticipa伽gin 伽e