荧光相关光谱-三维扫描共焦荧光成像联用系统研究及生物应用.pdfVIP

分析化学 (FEN羽HUAXUE) 虫曾刊 第37 卷 2∞9 年 10 月 Chinese Joumal ofAnaiytical Chemi指y 8145 荧光相关光谱三维扫描共焦荧光成像联用系统研究及生物应用 徐占成 董朝青 任吉存* (上海交通大学化学化工学院，上海 2∞240) 单细胞分和配出才单个细胞发生的生物、。 如学过程进行动态跟踪，实现原位、实时分析，进而阐 释生命现象的奥秘.但是由于细胞体积小，细胞内成分复杂，现有的原位分析法干扰严重等问题，单 (活〉细胞分析仍然是一个具有挑战的课题川。 荧光相关光谱 (FC创作为一种单分子检测技术，已逐渐被周到细胞生物学领域。 Carl Zeiss 公司 近年来将荧光相关光谱系统与共聚焦荧光扫描系统系统联用，逐步尝试将其用于单细胞研究。但是该 系统有一定局限性。其中采用的共聚焦荧光扫描系统采用扫描镜改变光路的方法来改变聚焦点位置， 实对细胞的三维扫描和定位分析。这种并法扫描精度和回复性都较低〈数百纳米比同时在对非物镜焦 点位置进行扫描时会产生光学变形(非物镜焦点区的光学构型已不再具有三维高斯分布)，导致在扫描 成像后原位分析的精度较差，获得的荧光相关光谱信息具有较大的偏差(如在非物镜焦点区分析时检 测微区大小，形状的变化等〉。这些因素都极大地影响了荧光相关光谱在单细胞分析中的应用[叫。 本研究尝试在本实验室建立的荧光相关光谱系统的基础上，克服荧光扫描显微镜通常采用的光荣 扫描的缺点，组装一套由载物台二维扫描(X，Y) 和物镜一维扫描(z)组成的三维扫描系统，形成具 有纳米位移精度的三维扫描成像和1荧光相关光谱单分子检测系统， 实现对活细胞的三维扫描成像和原 位的荧光相关光谱单分子检测分析。 在本系统中，保持激发光路固定不变，样品(如细胞〉 随载物台迸行X， y二维扫描 (100 阳x loo 阳)和 Z方向 的物镜轴向定位(100 1ll1l)相结合的方法实现对细胞的三维 光切片扫描，然后来用荧光相关光谱系统对目标区域内生 物大分子进行岛生分子探测研究。 问 \ 本研究构建的系统结构图如图 l 。目前已实现了仪器 一 的单细胞的主维扫描成像和原位的荧光相关光谱单分子探 Iile幢 测分析功能。 图2 是采用该系统测得的则叫amine green 的FCS 曲 线。测得系统的共焦检测体积为0.24 伍。图3 为在不同深 R.巳幢 度 (z 值〉对 Hela 细胞进行荧光扫描图像。 HeLa细胞用 .且A MPA修饰的发射波长为5佣m的CdTe 盘子点t制已。由 4111 图3 可见， CdTei童子点基本分布在细胞的外表团. 这种新的扫描模式可以达到不改变聚焦区形状实现原位分 11 -11. 二E 析，极大地提高了荧光相关光谱单分子检测分析的准确性、 JIlJt lit醋 且跟卡