玉米麦根酸测定方法研究.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENxIHuAxuE)研究报告 第1期 ChineseJoumalof 66～70 2008年1月 AnalyticalChemistry 玉米麦根酸测定方法研究 王维婷 张春庆+ 李鹏 (山东农业大学作物生物学国家重点实验室，泰安27lOl8)(山东省农业科学院原子能所，济南250014) 摘要禾本科作物麦根酸类物质(MAs)分泌量的准确、快速测定，对于铁营养高效育种及缺铁耐性的生理 研究具有重要价值。以玉米自交系为材料，根据麦根酸类物质的溶铁特性，建立了IcP—AES间接测定麦根酸 类物质的方法，改良了脱氧麦根酸(DMA)的uV-HPLc直接测定法，并与传统的比色法测定结果进行比较。 结果表明，采用IcP．AEs法，以Fe：0，粉末作为活化对象，与采用Fe(0H)。的传统方法测定结果相比，结果稳 它禾谷类作物麦根酸类物质分泌量的一种简单、快速的方法。改良的uV-HPLC法也具有准确、高效的特点， 可应用于禾谷类作物DMA分泌量的直接测定。 关键词 玉米，麦根酸，分光光度法，等离子体原子发射光谱仪，紫外高效液相色谱法 1 引 言 缺铁是世界农业生产中普遍存在的限制因子。在干旱半于旱地区的石灰性土壤中，作物的缺铁问 题更为严重…。禾本科植物在长期缺铁的环境条件下形成了独特的适应机制，通过从根系分泌麦根酸 类(MAs)，也称植物铁载体(Ps)，来螯合土壤中难溶性的铁，使之易于被植物吸收利用心’3J。因此，麦根 酸类物质代谢的研究在作物铁营养高效育种方面有着重要意义。 目前，有关麦根酸类物质的合成HJ、分泌151及作用方式∞1方面的相关研究已经受到普遍关注，与 MAs合成相关的基因也已先后被克隆出来。出于研究的需要，前人针对麦根酸类物质定性的定量测定 方法也做了大量的研究工作，现有的测定方法按照测定对象不同可以分为两类：一类是利用MAs能与 铁螯合形成Fe—MAs复合物的特性，通过比色法测定根洗液溶铁能力，从而间接反映根洗液中MAs的含 量捧，9o；另一类是利用高效液相色谱分析法或其它方法直接对从根洗液中纯化得到的MAs进行分析，主 要有纸层析法或薄层层析法¨…，荧光分析阳离子交换高效液相色谱法【1l12J，荧光分析离子配对高效液 相色谱法¨划和反相HPLc-PITc衍生法¨刮等。 传统的比色法由于测定条件等的变化和待测液中其它成分的影响，测得的MAs的含量只是相对 量[¨。荧光HPLC方法测定麦根酸类物质的优点是灵敏度高，尤其是经过改进后的方法能更加彻底的 分离出6种MAs，并对其进行准确的定性定量分析；缺点是流动相复杂，衍生化反应难以控制，单个样品 分析时间长。Neumann等¨到改进后的方法测定单个样品仍然需要30min，并且需要进行非常复杂的纯 化步骤，不适用于进行大量材料的快速筛选。从育种的角度看，有必要建立一种简单、快速、准确的可以 用于大量材料分析的MAs测定方法。 本研究以玉米为材料，通过对现有分析方法的比较和改良，以期建立起可以快速间接或直接分析大 量资源MAs分泌量的方法，为玉米及其它禾谷类作物麦根酸代谢的生理和遗传研究奠定方法基础。 2 实验部分 2．1仪器与实验材料 c，。柱 mm×4．6 (250 利用分光光度法和电感耦合等离子体原子发射光谱法(IcP—AEs)间接测定麦根酸代谢量时，共采 2007旬6J07收稿；2007旬8—18接受 本文系973计划前期研究专项(No．2007cBll6208)和山东良种产业化工程项目资助 }E—mail：cqzhaJlg@sdau．edu．cn 第1期 王维婷等：玉米麦根酸测定方法研究 67 用了3034(1)、丹02(2)、384l(3)、B尖八(4)等16个玉米自交系。 黄野四(19)、黄早四(20)等15个材料。本实验共采用31个玉米自交系。 2．2 玉