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玫苯胺共振光散射法测定DNA 刘 晨，陈小明’，向海艳，李松青，夏 殊，刘安喜 (湘潭大学化学化工学院．潮南湘潭411105) 摘要本文研究了三苯甲烷类碱性染料玫苯胺与DNA作用的共振光散射光谱，在pH=10．5～1l的范围 内．D№的加入导致攻苯胺共振光散射的增强，在485眦l处，存在一共振光散射增强峰，其强度与DNA的浓 度呈线性关系，据此建立了一种测定DNA的共振光散射法。方法的线性范围为0～1．00 rr】g·L～，检测限为 14．2 ng·n1L一。将该方法用于混合样品中DNA的测定，结果令人满意。 主题词玫苯胺；共振光谱散射(RLS)；DNA 中圈分类号：06“．14 文献标识码：A 文章缡号：1000—0593(2001)05一0697—04 产品)于0～4℃下缓慢溶于去离子水中．并于低温保存．操作 引言 液浓度为25mE·L～。 玫苯胺溶液是将玫苯胺溶于0．1％的乙醇溶液中，配制 核酸是最基本的生命物质之一，决定着生物体内蛋白质 成1．0×10qnd·L。1溶液。 的合成及其遗传变异的特性。目前，核酸的测定方法除了经 所用缓冲溶液为NH—NH．a缓冲液(pH=11)。所用水 典的二苯胺分光光度法“1以外，较常用的是荧光光谱法。由 为二次去离子水，其余试剂为分析纯。 于DNA的内源荧光很弱，故多采用荧光探针，如溴化乙锭 1．3实验方法 (EB)Ⅲ等。 在25mL比色管中依次加入1．00 ITlL攻苯胺溶液，一定 1993年，P∞r锄ack等用普通荧光分光光度计建立了共量的标准DNA溶液或试样溶液，轻摇，使之混合均匀，然后加 振光散射技术”】。黄承志等将其应用于核酸的定量”o】，建 入2．00n止N心一N|{4a缓冲液，稀释至刻度后摇匀。将溶液 立了纳克级的测定方法，其检测限比荧光猝灭法低一个数量 置于^咖=^。处进行同步扫描，可得共振光散射光谱。于共 级。此后，这一简便灵敏的方法得到了广泛的应用与研究。 振光散射峰485眦处测量散射光强度。激发和发射狭缝宽 利用有机染料共振光散射来测定核酸的报道不断出现，如藏 m。 度均为5．0 红f“、酚藏花红c…、乙基紫‘…、罗丹明B【…、耐尔蓝硫酸盐m1 等。本文研究了三苯甲烷类碱性染料玫苯胺与DNA作用的 2结果与讨论 共振光散射光谱．发现在碱性条件(pH=10．5～11)下，在485 nm处，攻苯胺与D卜IA的结合物存在一共振光散射增强峰，2．1玫苯胺与DNA体系的光谱性质 其强度与DNA的浓度呈线性关系．据此建立了一种DNA的 图1为玫苯胺．Dnn体系的共振光散射光谱(RLS光 测定方法，该方法简便、可靠、灵敏度高，应用于混合样品的分 谱)，图2为玫苯胺一DNA体系的紫外一可见吸收光谱。 析，结果令人满意。 由图l可以知，DNA本身RLS信号很微弱。相对而言， 玫苯胺的RLs信号略强，在354r吼附近有一宽阔的散射峰， 1实验部分 它对应于紫外一可见光谱350m1附近的宽阔峰谷。而RLS 光谱上攻苯胺在549曲·处的徽弱RLs信号贝Ⅱ缘于其在540 1．1仪嚣 588 日本岛滓RF一540型荧光分光光度计；日本岛津uv．265nm均出现增强的共振光散射峰。其中，33