8型腺相关病毒介导短发夹状RNA在小鼠肝脏的表达及其功能.pdfVIP

上海 交通大学 学报 (医学 版 ) l438· Journal of Shanghai Jiaotong University(Medical Science) Vo1．27 No．12 Dec．2oo7 文章编号：0258—5898(2007)12—1438—06 基础研究 · 8型腺相关病毒介导短发夹状RNA在小鼠肝脏的表达及其功能 陈颖伟 ， 久保寺 ， 李 一 ， 大西威一郎 ， 仁科一隆 ， 李定国 ， 横田隆德 (1．上海交通大学 医学院新华医院消化内科，上海 200092；2．日本东京医科齿科大学神经内科，东京 113—8519) 摘 要：目的 以内源性基因超氧化物歧化酶 1(SOD1)为靶基因，观察经单次尾静脉注射后8型腺相关病毒(AAV8)介导的短 发夹状 RNA(shRNA)在小鼠肝脏内的表达、对靶基因的沉默效应以及重组 AAV8-SOD1 shRNA的副反应。方法 利用 AAV8载 体系统的双启动子构建能同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和 SOD1 shRNA的重组 AAV8一SOD1 shRNA。采用 Northern blot和 Western blot分别检测SOD1 shRNA在小鼠肝脏内表达水平、靶基因 SOD1在mRNA和蛋白水平表达变化、肝细胞微小 RNA122 (miRNA一122)表达水平；标准酶法测定小鼠肝功能；酶联免疫实验测定干扰素一 (IFN—ot)水平；经 HE染色对肝组织进行病理 学观察。结果 经尾静脉注射重组 AAV8一SOD1 shRNA后，小鼠肝组织中可检测到 SOD1 shRNA和 SOD小干扰 RNA(SOD siRNA)反义链的表达；靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达均明显受抑；血清转氨酶轻度升高，但 IFN—ot水平无上调；肝组织 无明显病理学改变；肝细胞miRNA一122水平无明显下降。结论 经尾静脉单次注射重组AAV8-SOD1 shRNA后，SOD1 shRNA后 可在小鼠肝脏中高效表达并沉默靶基因表达。重组 AAV8一SOD1 shRNA对小鼠机体无明显副反应。 关键词：AAV8； shRNA； RNA干扰； 超氧化物歧化酶1 中图分类号：Q786； R512．6 文献标志码：A Study of adeno-associtated virus serotype 8 mediated shRNA delivery and function in livers of mice CHEN Ying-wei’ Takayuki Kubdera ，LI Yi ，Iichirou Ohnishi ，Kazutaka Nishina ，LI Ding．guo’ Takanori Yokota ， ． ( Department of Gastroenterology，Xinhua Hospital，School of Medicine，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200092，China； 一Department ofNeurology。Tokyo medical and Dental Une~ity，Tokyo 113—8519，Japan) Abstract： Objective To investigate the expression of short hairpin RNA(shRNA)mediated by adeno—associated virus serotype 8 (AAV8)in the livers after a single injection from tail vein of ICR mice．At the same time，the suppression of endogenous target gene， superoxide dismutase(SOD1)and the side effect of recombinant AAV8一SOD1 sh