内生真菌培养液对东北红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响.pdfVIP

植物学通报ChineseBulletinofBotany 2008，25(5)：552—558，WWW．chinbullbotany．com · 实验简报- 内生真菌培养液对东北红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响 李永成’一，陶文沂r ’江南大学教育部工业生物技术重点实验室，无锡 214122；海南大学食品学院，海口570228 摘要 产紫杉醇的内生真菌(Fusariummaire1)先培养在B5液体培养基中，然后制备成内生真菌培养液。在东北红豆杉(Taxus cuspida~)细胞悬浮培养的不同阶段(5、1O和15天)，用不同剂量的内生真菌培养液(2、4和6mL)分别进行处理。结果表明， 在用4mL内生真菌培养液处理的植物细胞中可获得最高的紫杉醇产量(5。88mgL· )与释放率(67％)，分别是对照的1．9倍与 5．6倍。添加时间方面，在植物细胞培养周期的第5天添加4mL内生真菌培养液，可获得最佳效果，紫杉醇产量与释放率分别 为6．1mg-L。与‘75％，分别是对照的2倍与6，8倍。与其它诱导子相比，4mL内生真菌培养液不仅可提高紫杉醇的释放率，而 且不会引起东北红豆杉细胞膜的明显伤害，说明内生真菌发酵液激活了紫杉醇主动运输过程中的相关酶类。 关键词 内生真菌，美丽镰刀菌，紫杉醇，植物细胞悬浮培养，东北红豆杉 李永成，陶文沂 (2008)．内生真菌培养液对东北红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响．植物学通报 25，552—558． 紫杉醇是一种优良的抗癌药物(SuffnessandWall， 1993；Yukimuneeta1．，1996；MirjalilIandLinden， 1995)，主要存在于裸子植物红豆杉科(Taxaceae)的红豆 19961。 杉属(Taxus)和澳洲红豆杉属(Austrotaxus)植物中。红 很多报道表明，真菌诱导子能有效促进植物细胞中 豆杉属植物生长非常缓慢，而且其紫杉醇的含量普遍很 紫杉醇的合成，但报道中的真菌诱导子均来 自于真菌菌 低。因此有限的供应成为紫杉醇在临床应用中的最大 体的粗提物(兰文智等，2002；仇燕等，2003)。本实验 瓶颈 。 室曾从南方红豆杉(maire1)中分离得到一株能够产生 为解决紫杉醇供需之间的矛盾，多年来，科学家在寻 紫杉醇的内生真菌(Fusariummaire1)(Xueta1．，2006)。 找及扩大紫杉醇药源方面做了大量工作。目前主要的 本研究利用该内生真菌(Fmaire1)的浓缩培养液作为诱 生产方法有：全化学合成法 (Nicolaoueta1．，1994； 导子探讨了其对东北红豆杉( cuspidata)细胞生长及合 Holtoneta1．，1995)、半合成法 (Commercneta1．， 成紫杉醇的影响，进而阐明它们之间的相互关系。研究 1995)、内生真菌发酵法(林福呈等，2003)、人工种植 发现该内生真菌对东北红豆杉悬浮培养细胞中的紫杉醇 红豆杉(张佐玉，2000)以及植物细胞悬浮培养法。其中， 合成与释放均有良好的诱导作用，实验结果对紫杉醇生 植物细胞悬浮培养法被认为是未来最有前途的生产方 产方法的开发有一定参考意义。 法。紫杉醇作为红豆杉中的一种次生代谢物，像其它次 生代谢物一样，被认为是植物对外界胁迫(如微生物、 1 材料与方法 昆虫和病原菌侵袭等)所产生的防御反应的一个分支。 在植物细胞悬浮培养法中，促进紫杉醇合成的方法都基 1．1 植物细胞的悬浮培养 于该原理(Zhaoeta1．，2o05)。其中，利用各种诱导子 东北红豆杉(TaxuscuspidataSieb。et．Zucc．)细胞培养 通过激活植物细胞的防御反应来促进紫杉醇的合成是植 在含0．2mgL· 萘乙酸、0．15mg-L 6一苄基嘌呤和25 物细胞悬浮培养法的主要技术手段(Fett-Netoeta1．， g—L一’蔗糖的B5液体培养基中。 250mL三角瓶 内倒 收稿13期：2008-04—23；接受31期：2008—09-01 基金项 目：国家自然科学基金(N30470016) ’通讯作者。E-mail：wytaol946@163．com 李永成等：