巨大芽孢杆菌表达外源蛋白的特点及其研究进展.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2008，28(4)：93—97 巨大芽孢杆菌表达外源蛋 白的特点及其研究进展 牟 琳 王红宁 邹立扣 (1四川农业大学生命科学学院 雅安 625014) (2四川大学生命科学学院动物疾病防控生物工程研究中心 成都 610064) 摘要 巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的分泌型基 因工程宿主菌，现 已广泛应用于工业和学术研 究领域，它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。综述了其 自身的优点、 表达载体的特点、巨大芽孢杆菌的转化方法、外源蛋 白的表达、高效表达的策略以及表达系统的 应用。 关键词 巨大芽孢杆菌 外源蛋 白 高效表达 中图分类号 Q789 巨大芽孢杆菌表达系统是一种很好的表达外源基 快。在许多生态环境 中都存在着 巨大芽孢杆菌，例如 因的系统。由于其分布广泛，生化功能多样，以及能表 肉类加工厂的废弃物中，石化产品的排出物中都有巨 达、分泌、加工外源蛋白而不降解外源蛋白，巨大芽孢 大芽孢杆菌，另外，巨大芽孢杆菌在28～37~C都能很好 杆菌越来越多地作为表达外源基因的宿主菌，在工业 地生长 ，它的这些特点能有效降低培养成本，便于工业 以及学术研究领域得到了广泛的应用。 化生产 。 2．2 蛋 白质表达产量高，稳定性好 1 巨大芽孢杆菌概述 与其它芽孢杆菌相 比，巨大芽孢杆菌不具有碱性 巨大芽孢杆菌体型巨大，超过 60tLm (2．5×2．5× 蛋白酶，表达的外源蛋 白不会被降解，重组质粒稳定， 10)，是大肠杆菌体积的100倍以上 。其能依靠多种 不易丢失 。此外，巨大芽孢杆菌细胞壁的组成简单， 碳源生长，因而分布十分广泛。同时，巨大芽孢杆菌能 只含有肽聚糖和磷壁质，因此在分泌的蛋 白质产品中 降解一些顽固的难降解的杀虫剂E2,3]，因此对环境具有 不会混杂有内毒素 (热源性脂多糖)，因此外源蛋 白产 十分重要的作用。 量大，适用于工业大规模的蛋白质生产。 一 些巨大芽孢杆菌的蛋 白质具有重要的作用。例 2．3 分泌量大且分泌的蛋白易纯化 如：其细胞色素 P-450单加氧酶系同真核细胞色素 P． 在巨大芽孢杆菌中表达的蛋 白既可以存在于胞 450单加氧酶系相似，在许多疾病 中发挥着类似的作 内，又可以存在于胞外。由于其只有一层细胞膜，因而 用。另外，在工业上，巨大芽孢杆菌分泌的酶应用也十 可以大量分泌蛋白至培养基中，蛋白跨越细胞膜后，被 分广泛，如淀粉酶应用于面包生产、青霉素酰胺酶应用 加工和直接释放到培养基中以活性结构生成而不发生 于合成新型人工抗生素等。很多基因在该菌 中都得到 聚集，避免了复性的困难 。产物与大量的细胞蛋白 了较好的表达及分泌。 分离，回收和纯化蛋 白较为简单。 2 巨大芽孢杆菌在表达外源蛋白中的优点 2．4 良好的发酵基础和生产技术 2．1 能利用多种