饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定.docVIP

实验三、饲料中粗蛋白质的测定 【学习目标】 掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。 一、原理 饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为6.25)，即为粗蛋白质的含量。上述原理的主要化学反应如下： 催化剂 1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O 加热 2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO4 3.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O 4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3 系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。 二、仪器设备 1.样品粉碎机 40目分样筛； 2.分析天平 感量0.0001g； 3.电子天平 感量0.0001g； 4.工业天平 感量0.01g； 5.六联电炉 6×800-1000W； 6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)； 7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml； 8.凯氏烧瓶 100.0ml； 9.烧杯 250.0ml； 10.三角瓶 150.0ml； 11.容量瓶 100.0ml； 12.移液管 10.0ml； 13.量筒 10.0ml、25.0ml。 三、试剂 1.浓H2SO4 分析纯,含量为98%，无氮。 2.混合催化剂：CuSO4:Na2SO4=1：10分析纯。 为了加速消化过程，通常多使用还原性催化剂CuSO4，它的作用是二价铜离子，先被还原，后被氧化，从而促进了样品中有机物质的消化。 2CuSO4+C Cu2SO4+SO2↑+CO2↑　 Cu2SO4+2H2SO4 2CuSO4+ SO2↑+2H2O　 消化液中加入硫酸钠或钾盐，目的在于提高浓H2SO4的沸点为317.0℃，加入无水硫酸钠或钾盐后，硫酸沸点可提高到325.0～341.0℃。 3.甲基红～溴甲酚绿混合指示剂 0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，保存期不超过三个月。此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈兰色。 4.2.0%硼酸吸收液 溶解2.0g分析纯硼酸于100.0ml 容量瓶中，加蒸馏水至100.0ml，摇匀备用。 5.40.0%饱和NaOH溶液 溶解40.0g分析纯氢氧化钠于100.0ml容量瓶中，加蒸馏水至100.0ml，摇匀备用。 6.0.05mol/L HCL标准液 取分析纯浓HCL(比重1.19)4.2ml，加蒸馏水稀释至1000.0ml，用基准物质标定。将优级纯无水Na2CO3基准物于100.0℃干燥箱烘1～2h，干燥器冷却30.0min，准确称取0.0130～0.0150g于三角瓶，加50.0ml蒸馏水溶解，加2滴甲基红指示剂，用预配约0.05mol/L HCL滴定至紫红色，记录HCL用量，计算出HCL的准确浓度，再稀释为所需浓度。 计算： 四、测定步骤 1.消化 精确称取饲料样本0.5000～1.0000g，以称样纸卷成桶状无损的移入100.0ml洗净烘干的已编号的凯氏烧瓶中，加入1.0-1.5g混合催化剂，沿着凯氏烧瓶壁加入10.0 -15.0 ml浓硫酸，将凯氏烧瓶放于毒气厨中电炉上消化，为防止消化时液体溅失，可再加两粒玻璃珠，先低温加热防止泡沫浮起，待泡沫消失后，提高加热温度至沸腾。消化时要经常转动凯氏烧瓶，如果有黑色炭粒消化不全，可将凯氏烧瓶取出于沙盘，待凯氏烧瓶冷却后，用少量的蒸馏水沿凯氏烧瓶瓶颈壁冲洗凯氏烧瓶内壁上黏附少量黑色炭粒于硫酸溶液中，继续消化。消化中途发现硫酸少，可补加少量浓硫酸后继续消化。至溶液完全澄清透明，无黑色炭粒呈蓝绿色为止，