饲料分析与检测实验：饲料中胡萝卜素的测定 免费.docVIP

实验十二 饲料中胡萝卜素的测定 【学习目标】 掌握饲料中胡萝卜素测定的方法，通过饲料胡萝卜素测定实际操作，了解并掌握胡萝卜素的测定原理和方法，学会进行各类鲜、干饲料，动物性饲料及多脂肪性饲料中胡萝卜素含量的测定。 一、原理 吸附剂对饲料中的胡萝卜素、叶绿素、叶黄素、玉米黄素等色素有不同的吸附力。用石油醚和丙酮等有机溶剂将上述色素混合物提取后，使其通过装有氧化镁吸附剂的层离装置，吸附剂对不同色素吸附力不同，各种色素会在吸着柱上形成一条条清晰的彩色层带，其中的胡萝卜素因吸附力最弱而处于最下层。用洗脱剂冲洗层离柱，位于最下层的胡萝卜素首先被冲出。将其收集，用分光光度计测定浓度。再根据胡萝卜素标准曲线，可查找并计算出所测饲料的胡萝卜素含量。 二、仪器设备 分光光度计 1台 抽 气 机 1台 蒸 锅 1个 分液漏斗 250.0ml 4个 玻璃研体 容量100.0ml，附研锤 2个 小玻璃棒 长20.0cm 1支 层 离 管 2支 试 管 1.5×15.0cm 1支 塞 棒（玻璃一端装软木塞，其直径能在层离 管内上下移动为宜） 1支 量 筒 带塞，容量50.0ml 2个 三 角 瓶 500.0ml 2个 容 量 瓶 50.0ml 9个 100.0ml 1个 抽 气 管 （或内装试管的抽滤瓶） 2个 三、试剂 胡萝卜素 晶体纯β-胡萝卜素或90.0％的β-胡萝卜素和10.0％α-胡萝卜素。若无纯胡萝卜素，也可用重铬酸钾（分析纯）代替。 石油醚 1.沸点40.0-70.0℃，用于测鲜饲料 120.0ml 2.沸点80.0-100.0℃，用于测干饲料 120.0ml 乙醚 分析纯 150.0ml 丙酮 分析纯 80.0ml 硫酸钠 分析纯 4.0g 氢氧化钾 分析纯 10.0mg 氯仿 分析纯 10.0ml 活塞滑剂（分液漏斗用）22.0g甘油加9.0g可溶性淀粉，加热至140.0℃后放置1.5h，倒出上清液，静止隔夜即可用。 玻璃粉 用铁磨将碎玻璃磨成细粉，通过20目标准筛，再用浓盐酸浸泡，溶解其中铁质。之后用氢氧化钠浸泡并以清水冲洗至呈中性，放入烘箱烤干备用。 提取剂 1:1丙酮、石油醚（低沸点）混合液。 10.0ml 1:7丙酮、石油醚（高沸点）混合液。 40.0ml 吸附剂 一般用氧化镁（化学纯）。用前将其通过80目标准筛，再置于茂福炉中，在800.0-900.0℃灼烧3小时备用。用过的氧化镁可放入烘箱烘干后回收再用。氧化镁也可用氧化铝代替。 洗脱剂 是用3.0ml丙酮加97.0ml石油醚制成的丙酮、石油醚混合液。丙酮越多洗脱力越强。 脱脂棉 少许 四、操作 胡萝卜素的测定要求在暗室中进行。操作全过程包括提取、层离和比色三大步骤。不同状态饲料（新鲜、风干、动物性及高脂肪性饲料）除提取操作过程有差别外，其它操作过程完全相同。 （一）提取 1.新鲜饲料 将新鲜饲料洗净吹干，切碎混匀后称取样本1.0-2.0g（约含胡萝卜素50.0-60.0mg）。把样本置于蒸锅内蒸汽处理2.0-5.0分钟，破坏饲料中的氧化酶。取出后放入研钵中加一小勺玻璃粉和5.0ml提取液（1:1丙酮、石油醚混合液），用玻璃锤充分研磨。静止片刻后，将上清液移入盛有100.0ml蒸馏水的分液漏斗中。剩于残渣中加入5.0-8.0ml提取液继续研磨，待混合液澄清后倒入同一个分液漏斗，如此反复提取8-10次，直至提取液无色为止（取数滴研磨提取混合液置于盛有蒸馏水的试管中，摇动后上部石油醚无色为准）。在提取